为什么说“PCR”之父凯利·穆利斯彻底的改变了现代生物学？

碳、氢两种元素组成。三型聚丙烯管，原料分子只有碳、氢元素，没有有害有毒的元素存在，卫生可靠，不仅用于冷热水管道，还可用于纯净饮用水系统。主要作用是为聚合酶链式反应提供容器。常见的管由管体、盖体组成，管体和盖体连接在一起，盖体上有空心圆柱形凸起。微量离心管为了确保离心的要求，管壁一般较厚，而塑料管为了确保传热的速度和均匀，管壁较薄，所以，实际应用中，我们是不建议将两者混用的。此材料，就是消费后再回收利用的塑料，可以助力国家的碳达峰碳中和，促进资源的循环再利用，变废为宝。最早的塑料离心管都是单个的，在批量检测时工作量大，不方便操作。

1、准备PCR管和软管：首先需要准备好需要连接的PCR管和软管，确保PCR管中已经加入了反应物，软管中也已经加入了需要接收反应物的试剂。2、使用连接器连接：将连接器插入PCR管的顶部，确保连接器与PCR管紧密贴合，然后将软管插入连接器的底部，确保软管与连接器紧密贴合。3、检查连接是否牢固：连接完成后，需要检查连接是否牢固，通常可以轻轻拧动连接器和软管，确保连接紧密，不会出现松动或者脱落的情况。

离心管与八联管是有明确的区分的，下面就是具体的分析：本生(天津)健康科技有限公司VIOXPCR耗材品种全，可替代仪器原厂耗材，性价比高，质量稳定，对用户可以节省实验成本，对公司每月都有订单，现货库存，顺丰快递配送，下单3个工作日即可到达用户手中。离心管定义：管状试样容器，可带密封盖或压盖。所属学科：机械工程(一级学科);实验室仪器和装置(二级学科);实验室离心机-实验室离心机零部件及附件(三级学科)按照大小大量离心管(500mL、250mL)普通离心管(50mL、15mL)微量离心管(2mL、1.5mL、0.65mL、0.2mL)八联管定义：pp材质，薄壁设计，适用于使用100ul反应体系模块的荧光定量PCR仪及普通/梯度PCR仪。产品介绍：>以高品质生物级聚丙烯为原料，超洁净生产环境生产。>管壁薄而且壁厚均匀，保证了快速的传热效率和样品的受热均匀。>管盖专业级超亮光学平面区域，保证了检测光的通过率。>与PCR仪导热槽配合设计，与导热槽配合性能好，更加利于热传导。>独特设计，与荧光定量PCR光学平盖配合适中，有效防止样品蒸发。>高精度模具制造及精密注塑工艺，保证了产品的品质及批次间产品均一性和稳定性。>正面模刻字母标识，方便样品识别区分。适用仪器：适用于ABI7500fast、stepone/plus;BIO-RADCFX96、MJ;Roche480等100ul反映体系的荧光定量PCR仪及普通PCR仪适应客户：医院检验科PCR实验室，中心实验室，肝病中心；第三方检测机构，科研院所，大专院校，制药厂，试剂生产厂家，疾控中心，检验检疫。

氧化。PCR八连管是由德国制造进口，超薄壁的PP材质制成，可兼容绝大多数常用PCR的化工仪器，该仪器用紫外线消毒会导致仪器氧化，而失去功能。PCR管系列产品均采用高品质高分子材料聚丙烯（PP）制成，适用于各种PCR和荧光定量PCR实验。

不需要。进口的pcr管和枪头，本身就是灭过菌的，可以直接使用。PCR管采用 USP 认证的进口医疗级高透明聚丙烯作为原材料,表面光滑从而确保样品间高效和均一。满足准确高效的 PCR 反应,应用于基因检测、疾病诊断、药物研发等领域。

您所问的PCR应该是生物方面的，具体是分子生物学所用。 所以PCR所用管，必须是无菌。不得产生有影响实验的物质。离心管。可以不用无菌。其他和生物用一样

PCR反应板是96孔或者384孔的，是专门为批量反应设计的，其原理是PCR仪和测序仪的通量一般为96或者384，你可以上网搜一下图。离心管不一定是PCR管，离心管按照其容量分好多种，常用的有1.5ml，2ml，5ml，15或者50ml，最小的一种（250ul）可作为PCR管使用。

pcr管属于医疗器械商品类目。根据查询相关公开信息显示，pcr管属于一个医疗用品，是一种试剂。

pcr管与仪器不贴合有缝隙不可以使用。根据查询相关公开信息显示：pcr管与仪器不贴合会影响热传导，从而导致热平衡时间延长，或根本达不到反应温度，最终导致PCR反应效率降低。

pcr管变形影响结果。pcr管变形会影响荧光信号传递,导致PCR反应体系随着循环的进行不断减少,影响PCR反应的正常进行。所以是影响结果的。

没有什么区别，不同的厂家生产的。

56mmx180mm; 标题栏你应该制作成块，以后每做一张图你都要画一次啊，是不是太麻烦了，按1:1的比例制作成块后做完图直接插入就可以了，比例可以在块属性里面改动，不管你出图的纸是多大的、绘图比例是多少，打印出来的实际尺寸都要符合国标规定.。

效果比较差。普通PCR反应管进行10uL体系的荧光定量实验，效果很差，而且明显灵敏度下降，检测结果不稳定。模板被降解或模板不足时也会出现无曲线扩增现象。

就叫PCR管

在PCR管上边不要写，是从上边采集荧光的，不要挡住。

一般都用平盖，鼓盖用的很少。以前做定量PCR的时候，有些仪器需要用鼓盖，是为了便于荧光检测。随着技术的进步，除了一些老牌子的定量仪器，新牌子的仪器已经很少用鼓盖了。

顶盖加热出问题了，有可能是顶盖没有加热，或者是顶盖没有到达预定位置，因此PCR管的顶部温度低，液体就不断蒸发，导致最后没有液体。另外还可以观察下PCR管，有些PCR管如果质量不好，管子封闭不严也有这种现象。

If you are talking about DNA amplification, that is polymerase chain reaction, short for PCR.

不可以。CR反应需要一定的时间和温度条件，顺序颠倒，样品和反应物的接触时间会被改变，会影响PCR试验的结果。

要看你机子的检测器在什么地方。做real time对管子的透光性和一致性要求很高，最好用八连管。否则背景都不一样怎么做？

要设置热盖的（Hot Lid），105℃够了

不属于医疗器械

当然需要 只要是实验仪器 都是需要消毒的 不消毒肯定是不行的哈

有些PCR仪器不是很稳定，建议你做梯度或者后继试验的时候，尽量将PCR管放在仪器的中间部分，同时仪器的四个角落可以放装满水的PCR管，这样可以使仪器温度相对稳定些。同时加样的时候，尽量在冰上操作，引物和酶避免反复冻融。

1．模板DNA的抽提。2．PCR操作 (在冰上操作)：（1）PCR反应混合液的配制：反应体系25 µL, 在无菌的0.2 mL离心管中按下列操作程序加样：（2）将反应混合液混匀, 然后每个PCR管中分装24 µL反应混合液，再加1 µL模板DNA，最后加1滴石蜡油，防止水分蒸发, 然后稍离心。（3）将PCR管放到PCR热循环仪中，按下列程序开始循环：（4）注意事项由于PCR灵敏度非常高，所以应当采取措施以防反应混合物受痕量DNA的污染。a. 所有与PCR有关的试剂，只作PCR实验用，而不挪作它用。b. 操作中所用的PCR管、离心管、吸管头等都只能一次性使用。c. 每加一种反应物，应换新的枪头（加样器的塑料吸嘴的俗称）。

我勒个去的，现在PCR仪都是热盖技术了，这种问题都是十几年前的问题了，哪里来的老古董出的题目？

　　1、试剂准备区。　　用于准备测试试剂。该区域为正压，以防止污染物溢出。该区域可分为三个区域：普通提取试剂准备区、PCR试剂准备区和PCR主反应液准备区。在普通提取试剂准备区准备样品核酸提取所需的裂解液、提取液等；PCR试剂准备区用于PCR试剂的制备和保存。　　2、样品准备区。　　该区域没有压力设置要求。该区域用于对样品进行分类、研磨、破碎和均匀浆液。由于这些破碎、研磨和均匀浆液处理过程中会产生气溶胶，因此有可能阳性样品污染后续操作。该区域应与后面区域严格隔离，并放置在与后三个区域隔离的独立房间内。　　样品准备区还可设置专用的封闭区域或房间，用于样品的接收和储存。样品储存可放置冰箱，应与样品准备区的其他区域隔离。样品准备区的人员不得进入试剂准备区。　　3、核酸提取区。　　核酸提取区是从样品中提取核酸的区域。该区域为负压，以防止核酸溢出造成污染。样品准备区还包括从样品中提取和纯化核酸的区域，以及将核酸添加到包含PCR主反应混合液管的操作区域。添加样品后，应尽快覆盖PCR管的盖子。使用PCR板和胶盖时，阳性对照和包含目标序列的样品应与待测样品分开操作，以避免添加模板时交叉污染。　　4、扩增和产品检测区。　　该区域用于PCR扩展和PCR分析。PER仪器放置在该区域。房间保持负压，以防止核酸溢出。该区域的工作人员必须始终佩戴工作服和手套，并在离开房间前脱下，以防止扩增子污染其他地方。本房间应指定所有用于扩增和产品检测的设备。　　PCR实验室应采用全送全排气流组织形式，以避免各实验区交叉污染的可能性。同时应严格控制送风和排气比例，以确保各实验区的压力要求。

玻璃对于核酸有吸附作用，如果使用玻璃离心管进行离心，则会使DNA被吸附从而不能完成扩增，故本题正确答案为D。

　　PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟! 　　关于pcr技术论文篇一 　　技术的研究进展 　　摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。 　　关键词 PCR技术;研究进展;应用 　　中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02 　　PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。 　　1 PCR技术原理 　　PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3u2019端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5u2019-3u2019方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。 　　2 PCR技术的分类 　　在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。 　　2.1 实时荧光定量PCR技术 　　1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。 　　荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。 　　2.2 多重PCR技术 　　多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。 　　在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。 　　2.3 单分子PCR技术(SM-PCR) 　　单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。 　　单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。 　　3 PCR技术的应用 　　3.1 PCR技术在水产上的应用 　　基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。 　　3.2 PCR技术在微生物检测上的应用 　　1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。 　　4 展望 　　传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。 　　5 参考文献 　　[1] 常世敏.PCR在食品微生物检测中的应用[J].邯郸农业高等专科学校学报，2004，21(4)：23-25. 　　[2] 唐永凯，俞菊华，徐跑，等.实时荧光定量PCR技术及其在水产上的应用[J].中国农学通报，2010(21)：422-426. 　　[3] 吴学贵.LPS刺激点带石斑鱼免疫相关基因的克隆与组织表达差异性分析[D].海口：海南大学，2011. 　　[4] 侯立华，黄新，朱水芳，等.双色荧光多重PCR技术及在禽流感病毒检测中的应用[J].生物技术通报，2010(1)：168-172. 　　[5] 查锡良.生物化学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2009：483-485. 　　[6] 张杰道.生物化学实验技术PCR技术及应用[M].北京：科学出版社，2005：12-18. 　　[7] 谢海燕.黑线仓鼠LHR部分序列克隆及组织器官的表达差异[D].曲阜：曲阜师范大学，2011. 　　[8] KUBISTA M，ANDRADE J M，BENGTSSON M，et a1.The real-time pol-ymerase chain reaction[J].MoLecular Aspects of Medicine，2006，27(2-3)：95-125. 　　[9] AGINDOTAN B O，SHIEL P J，BERGER P H.Simultaneous detection of potato viruses，PLRV，PVA，PVX and PVY from dormant potato tubers by TaqMan real-timeRT-PCR[J].J Virol Methods，2007，142(1-2)：l-9. 　　[10] 李丽平.小麦慢锈品种叶片受条锈菌侵入后的木质素合成及调控研究[D].雅安：四川农业大学，2009. 　　[11] 薛霜，独军政，高闪电，等.实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用[J].中国农学通报，2010(7)：11-15. 　　[12] SCHUBERT J，FOMITCHEVA V，SZTANGRET-WISNIEWSKA J. Dif-ferentiation of Potato virus Y strains using improvedsets of diagnostic-PCR-primers [J].J Virol Methods，2007，140(1-2)：66-74. 　　[13] 袁继红.实时荧光定量PCR技术的实验研究[J].现代农业科技，2010(13)：20-22. 　　[14] 朱善元.生物检测技术PCR及其在兽医微生物检测中的应用[J].黑龙江畜牧兽医，1999(11)：21-22. 　　[15] 黄银花，胡晓湘，李宁，等.影响多重PCR扩增效果的因素[J].遗传，2003，25(1)：65-68. 　　[16] 陈诺，唐善虎，岑璐伽，等.多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展[J].生物技术，2010，37(10)：72-75. 　　[17] 刘连生.常规PCR技术与单分子PCR技术[J].医学信息，2010，23(11)：4379-4380. 　　[18] 顾超颖.汗孔角化病的临床分析，SSH1、ARPC3基因突变检测和表达谱分析[D].上海：复旦大学，2008. 　　[19] 唐永凯，俞菊华，刘波，等.翘嘴红鲌肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响[J].水产学报，2007，31(1)：45-53. 　　[20] 刘波，谢骏，苏永腾，等.高碳水化合物日粮对翘嘴红鲌生长、GK及GK mRNA表达的影响[J].水生生物学报，2008，32(1)：47-53. 　　[21] 俞菊华，戈贤平，唐永凯，等.碳水化合物、脂肪对翘嘴红鲌PEPCK基因表达的影响[J].水产学报，2007，31(3)：369-373. 　　[22] 孙淑娜，桂永浩，宋后燕，等.叶酸拮抗剂甲氨喋呤导致斑马鱼心脏发育异常及BMP2bHAS2表达下调[J].中国当代儿科杂志，2007，9(2)：159-163. 　　[23] SAWYER S J，GERSTNER K A，CALLARD G.Real-time PCR analysis of cytochrome P450 aromatase expression in zebrafish：gene specific tissue disyribution，sex differences，developmental programming，and estrogen regulation[J].General and comparative endocrinology，2006，147(2)：108-117. 　　[24] BEJ A K，MAHBUBANI M H，MILLER R，et a1.Multiplex PCR amplif-ication and immobilized capture probes for detection of bacterial patho-gens and indicators in water[J].Mol Cell Probes，1990，4(5)：353-365. 　　[25] ZHANG Z D，ALEXANDERSEN S.Detection of carrier cattle and sheep persistently infected with foot-and-mouth disease virus by a rapid real-time RT-PCR assay[J].Journal of Virological Methods，2003，111(2)：95-100. 　　[26] ZHANG Z D，BASHIRUDDIN J B.Quantitative analysis of foot-and-mouth disease virus RNA duration in tissues of experimentally infected pigs[J].TheVeterinary Journal，2009，180(1)：130-132. 　　[27] METZGER-BODDIEN C，BOSTEL A，KEHLE J.Salmonella sp.PCR-ELISA for analysis of food samples[J].J Food Prot，2004，67(8)：1585-1590. 点击下页还有更多>>>关于pcr技术论文

透明的更好。

无任何代表。易错pcr试剂盒不同颜色管子并未任何特殊代表，只是为了好看而设定的。该产品无论是作用还是功能方面都是非常不错的。

钟鼎生物技术公司基于与客户合作的实际案例，介绍了RT-PCR的实验流程，包括RT-PCR实验所需试剂耗材、RNA提取、RNA反转录为cDNA。 实验摘要 使用TRIzol提取样品总RNA，反转录获得cDNA，供下游实验使用。 1.试剂与耗材 试剂与耗材 Prime Script II 1st Strand cDNA Synthesis Kit，宝生物工程（大连）有限公司，6210B；总RNA提取试剂TRIzol，南京钟鼎生物技术有限公司，RK01-100； DL2000 DNA Plus Marker（100、250、500、750、1000、1500、2000 bp），南京诺唯赞生物技术有限公司，MD101。GelStain，北京全式金生物技术有限公司，GS101-01； DEPC，Sigma公司，D5758-25ML；Agarose，西班牙Biowest，91622； 离心管，美国Axygen，311-01-051；枪头，美国Axygen； 其它试剂均为国产分析纯。 2.主要实验仪器 主要实验仪器 超微量紫外分光光度计：NanoDrop2000，Thermo公司；台式高速冷冻离心机，美国BECKMAN公司，Allegra 21R； 电子天平，美国AHOMS公司，AR5120；紫外透射仪，美国Amersham Pharmacia公司，Hofer MV-25； 电泳仪：TY2795型，BIO-RAD公司；电泳槽：Sub-Cell GT Cell，BIO-RAD公司； 凝胶成像分析系统：GelDocXR型，BIO-RAD公司；雪花状制冰机，日本SANYO公司，SIM-F140AY65； 移液器，德国Eppendorf公司。 3.实验方法及结果 3.1.RNA提取 （1）组织匀浆：向样品中加入1 ml TRIzol试剂（组织块体积不要超过TRIzol体积的10%），用移液器反复吹打。 （2）将上述匀浆液室温放置5 min，待核酸和蛋白充分解离。每1 ml TRIzol试剂用量的匀浆液中加入0.2 ml氯仿，盖紧管盖，手动剧烈震摇15 s，然后室温静置2～3 min。 （3）4℃ 10,000 g，离心10 min。 （4）小心吸取上层水相（无色）加入到新试管中，同时计算所吸取的水相体积。 （5）加入所吸取水相等体积预冷的异丙醇，盖紧管盖，轻轻摇匀。 （6）室温静置10 min，待RNA充分沉淀。 （7）4℃ 10,000 g离心10 min。 （8）将上清弃除（注意别丢弃沉淀），每管加入1 ml 75%乙醇润洗，盖紧管盖，轻轻晃动离心管，以去除残留的异丙醇和盐份。4℃ 7,500 g离心5 min。 （9）将上清弃除，打开管盖，将RNA 沉淀干燥（室温挥发或真空干燥）。注意RNA沉淀不可完全干燥，否则难以溶解。 （10）将RNA沉淀溶解于适量的无RNase水中。 3.2.RNA琼脂糖凝胶电泳分析 提取好的RNA进行琼脂糖凝胶电泳，电泳图如下所示： 3.3.RNA浓度及纯度测定 3.4.RNA反转录为cDNA 3.4.1.基因组DNA去除 采用钟鼎公司的DNase I，在RNase free的离心管中配制如下混合液： 3.4.2.反转录反应 在PCR管中配制下列反应混合液： 65℃反应5 min，冰浴冷却。 在第一步的反应管中配制下列反转录反应液： 反转录反应条件的设置：30℃ 10 min，42℃ 30 min，95℃ 5 min。冰浴冷却。产物至于-20℃冰箱保存。 您与SCI只缺一个：《 RT-PCR技术服务 》 钟鼎生物官网

我也遇到相同的问题 求解答

具体的实验有具体的做法，去CNKI上查，会有收获的。

离心管不一定是pcr管，离心管按照其容量分好多种，常用的有1.5ml，2ml，5ml，15或者50ml，最小的一种（250ul）可作为pcr管使用。pcr反应板是96孔或者384孔的，是专门为批量反应设计的，其原理是pcr仪和测序仪的通量一般为96或者384，你可以上网搜一下图。至于裙边，这部分跟pcr本身就没什么关系了，有没有裙边主要是根据您使用的仪器决定的，比如有些测序仪上只能匹配半裙边的96孔板，而一般的pcr仪使用带不带裙边的板子都是一样的

因为圆的是突起的,水分经高温会蒸发到盖子顶部,因其突起有斜坡,水分会顺着趋势流下来,流入到管内.而平盖的,一是因为有时盖不紧,二是水分蒸发后到盖子顶部后会停留到盖内,积多了会从侧边流出流到管外去.如果想验证,可以做个对照.PCR做完后把两种情况下的体积测一下.

应该不会。污染主要有以下几点：（1）没有换枪头或操作不当污染了实验试剂；（2）PCR管，枪头等实验用品被污染；（3）PCR仪被污染。上面所提不具备严重污染的条件。

一般是0.2ml的。稍微大点或小点可能也可以。

常规材质，未做低吸附处理。如对液体蒸发方面要求高。需要购买货号PCR-02D-L-C单管进行试验，该货号的球面盖可以帮助液体回流。如仪器要求平盖，PCR-02-L-C也是可以的。

按要求应该灭菌。不过我有时灭，有时不灭，没发现有什么问题。

pcr八连管的英文翻译_百度翻译pcr八连管PCR eighth tubetube_百度翻译tube 英[tju:b] 美[tu:b] n. 管，管状物; 电子管; 地铁; 电视机; vt. 把…装管; 把…弄成管状; 用管输送; vi. 乘地铁; 不及格; [例句]He is fed by a tube that enters his nose.他靠鼻饲管进食。[其他] 第三人称单数：tubes 复数：tubes 现在分词：tubing 过去式：tubed过去分词：tubed

cDNA双链合成1. Superscipt II—RT合成第一链:1. 在一RNase-free的0.2ml PCR管中,加入xul mRNA(大约500ng)1ul Xho I Primer(1.4ug/ul)(5" GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTCTCGAGTTTTTTTTTTTTTTTTTT…3")11-x ul RNase-free water（大于500ng mRNA 分n管(500ng/tube)合成第一链, 第一链合成完毕后将n管合成一管进行第二链合成.）2. 混匀后,70℃反应10分钟;3. 反应完成后,立刻将反应体系置于冰上5min;4. 稍微离心一下,顺序加入以下试剂:4ul 5×first strand buffer2ul 0.1M DTT1ul 10mM dNTP(自己配制)5. 混匀，稍微离心反应物之后,42℃放置2分钟;6. 反应完成,趁热加入1 ul Superscipt II—RT,混匀;7. 42℃反应50分钟,然后70℃,15分钟灭活反转录酶.2. cDNA第二链的合成1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul 10mM dNTP(自己配制)xul dd H2O1ul RNase H(2U/ul)10ul DNA Polymerase I(10U/ul)总体系为200ul;2. 混匀后,16℃反应2.5小时;3. 70℃灭活10分钟;4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5．取2ul二链产物，同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder，确定双链的大小范围。注：一链，二链的电泳图是smear，且二链稍比一链大一些。3. 双链cDNA末端补平1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):6ul 10mM dNTP2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul)2ul BSA(10mg/ml)2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注：第3，第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程：1．溶液PE使用前应加入适量体积95%－100%的乙醇，混匀。2．向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB，混匀。3．加入spin column中，13000rpm离心1min。4．加入0.75ml buffer PE，13000rpm离心1min。5．13000rpm，再离心1min。6．将spin column放入一新的离心管中，加入50ul buffer EB，静置10min。7．13000rpm离心2min。8．加入30ul buffer EB，静置10min。9．13000rpm离心2min。10．加入1/10体积3M的NaAc，2.5倍体积无水乙醇，混匀，－20℃沉淀过夜。4 EcoR I adaptor 加接1. 往双链cDNA沉淀中加入9ul EcoR I adaptor(400ng/ul),4℃至少放置30分钟以充分溶解cDNA沉淀;2. 溶解完成后,顺序加入下列试剂:1.2ul 10×Ligase Buffer1ul 10mM rATP1 ul T4 DNA Ligase(4U/ul)3. 混匀后,4℃连接3days,或者8℃过夜连接;5 双链cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切1. 连接反应完成后,将反应体系70℃放置15分钟灭活T4 DNA Ligase;2. 稍微离心使反应物集中至管底,室温下放置5分钟,然后加入下列试剂:1ul 10×Ligase Buffer1ul 10mM rATP6ul dd H2O1ul T4 PNK(10U/ul)3. 37℃反应30分钟,然后70℃灭活15分钟;4. 稍微离心使反应物集中至管底;5. 室温放置5分钟;然后加入下列试剂:4ul Xho 10×Buffer2ul BSA5ul ddH2O8ul Xho I (10U/ul)6. 37℃反应1.5小时,然后65℃灭活酶10分钟;7. 反应完成,双链cDNA合成完毕。置于4℃准备回收。6.胶回收cDNA1．配制小胶数板（每个样品一板）：1%琼脂糖凝胶，2ul EB/300ml 胶2．取4℃保存样品上样，40ul/孔。3．电泳50V；1hr4．紫外灯下分别切下500~1kb、1.0-2.0kb及2.0-4.0kb cDNA 片段.，分别放入已做标记的1.5ml离心管中。5．称取胶重，加入三倍体积buffer QXI（例如，100mg胶中加入300ul buffer QXI）6．50℃ 水浴数分钟，至胶完全融化。用手指弹 QIAEX II 使重悬，每管中加入5ul QIAEXII7．50℃ 水浴10min，每隔2min 取出颠倒混匀数次，使QIAEX II 保持悬浮8．4℃，13000rpm，30sec。（弃上清，离心机中甩一下，吸取上清）9．加入500ul buffer QXI，轻弹管底使QIAEX II 重悬10． 离心并去上清（同操作8）11． 加入500ul buffer PE，重悬QIAEX II，离心30sec，去上清12． 再加入500ul buffer PE，重悬QIAEX II，离心30sec，弃上清，离心机中甩一下，吸去上清13． 超净台上吹干（至无乙醇味），加入10ul elution buffer，重悬QIAEX II，静置5min，13000rpm，30sec。吸上清，冰上放置。14． 取1ul上清上样电泳，同时做分子量标准（1kb ladder）及DNA含量标准（10ng，20ng）作对照。15． 将收回的cDNA置于-20℃内保存，据电泳结果，取适量DNA进行连接。注意事项：1．胶回收前电泳槽，电泳板，梳子等都要用1%的HCl浸泡过夜。2．胶回收时电压要稳定。 第一链的合成oligo(dT)引导的DNA合成法:利用真核mRNA分子所具有的poly(A)尾巴的特性,加入12-20个脱氧胸腺嘧啶核苷组成的oligo(dT)短片段,由反转录酶合成cDNA的第一链.缺 陷:因为逆转录酶无法到达mRNA分子的5"-末端,必须从3"-末端开始合成cDNA.对于大分子量的较长的mRNA分子而言,特别麻烦.随机引物引导的cDNA合成法 (randomly primed cDNA synthesis) :根据许多可能的序列,合成出6-10个核苷酸长的寡核苷酸短片段(混合物),作为合成第一链cDNA的引物.在应用这种混合引物的情况下,cDNA的合成可以从mRNA模板的许多位点同时发生,而不仅仅从3"-末端的oligo(dT)引物一处开始. 第二链的合成第一链的合成反应完成后，得到DNA/RNA杂交分子，在DNA聚合酶的作用下，以第一链为模版，合成cDNA的第二链。 变性降解除去杂交分子中的RNA,单链cDNA的3"端能够形成发夹状的结构作为引物,在大肠杆菌聚合酶I Klenow或反转录酶的作用下,合成cDNA的第二链.缺 点:在以S1核酸酶切割cDNA的发夹状结构时,会导致对应于mRNA 5"端的地方的序列出现缺失和重排. S1核酸酶的纯度不够时,会偶尔破坏合成的双链cDNA分子.自身引导法合成双链cDNA 原 理:以第一链合成产物cDNA:mRNA杂交体作为切口平移的模板,RNA酶H在杂交体的mRNA链上造成切口和缺口,产生一系列RNA引物,在大肠杆菌DNA聚合酶I的作用下合成cDNA的第二链.优点:a)合成cDNA的效率高b)直接利用第一链的反应产物,不需纯化c)避免使用S1核酸酶来切割双链cDNA3,引物-衔接头法

PCR=ρ*g*H。明管临界压力是指在明管中流体发生临界流时的压力，描述了明管中液体流动时，当压力达到或超过PCR时，流体将发生临界流。

半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用，用于测定体内目的基因的表达增加减少与否，即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较，观测目的基因表达增减，另外还要做一个β-actin的内参照对照。

不一样sanger法用化学方法一个碱基读取，然后在化学方法读下一个碱基PCR法，（末端终止法）4个PCR管分别加入（标记的A或T或C或G），其他成分一样。PCR时遇到标记的ATCG停止复制，最后得到分别以ATCG结尾的片段，电泳这些片段，就是DNA序列，PCR测序更高效快速

我帮你BS一楼。。。问反应体系，他给黏贴PCR的概念。。。。PCR反应体系，简单的说，就是PCR管子里所有东西的混合溶液，就是溶解有引物、模板DNA、游离碱基、Taq酶、甘油等等的水溶液。

1、紫外线透明真空管：紫外线透明真空管可以用于紫外线检测，但不能用于荧光检测，因为紫外线可以破坏荧光染料分子的结构，导致荧光信号降低或消失。2、玻璃真空管：玻璃真空管会吸收荧光信号，影响PCR检测结果的准确性。3、黑色或有色真空管：黑色或有色真空管会吸收荧光信号，导致PCR检测结果偏低。

如果用普通PCR检测不到条带是因为扩增模板量太低造成的，为了提高检测灵敏度和特异性，可以采用巢式PCR。其优点是： 1、克服了单次扩增平台期效应的限制，使扩增倍数提高，从而极大的提高了PCR的敏感性； 2、由于模板和引物的改变，降低了非特异性反应连续放大进行的可能性，保证了反应的特异性； 3、内侧引物扩增的模板是外侧引物扩增的产物，第二阶段反应能否进行，也是对第一阶段反应正确性的鉴定，因引可以保证整个反应的准确性及可行性。 但其亦有缺点： 进行第二次PCR坟增引起交叉污染的几率大。为了克服此缺点，可彩用同一反应管中巢式PCR，主要利用内外引物Tm值不同。 如果你已排除引物，酶，RNA提取，逆转录等等其他原因引起的PCR不成功，确定关键原因是模板量低的话，可以用巢式。但还是建议先排除一下其他可能因素，毕竟普通PCR简单。

PCR技术中复制完成不会切除引物，随着反应的继续，加入PCR反应管中的引物会不断地被消耗

跟质粒没什么必然关系吧，小白，哈。。。