动物细胞培养原理

细胞培养首先分为原代培养和传代培养.一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；二、传代培养首先进行细胞复苏:1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.细胞传代:1.贴壁细胞:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.2.悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.

细胞培养技术是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中，培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。一、动物细胞培养在所有的细胞离体培养中，最困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。⑴血清：动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，塑料等作为支持物。⑶气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件。二、植物细胞培养⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如药物的过程，植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。⑵激素：植物细胞的分裂和生长特别需要植物激素的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是最基本的激素。植物细胞的分裂，生长，分化和个体生长周期都有相应的激素参与调节。和动物细胞相比，植物细胞离体培养对激素要求的原理已经了解，其应用技术也已相当成熟，已经有一套能使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激素、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。三、微生物细胞培养微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂，因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度，而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻，玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等成为良好的微生物天然培养基。对于一些特殊微生物的营养条件要求，可以在这些天然培养基的基础上额外添加。

cell culture,细胞培养，既包括微生物细胞的培养，细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞培养是一种常见的生物技术，其步骤主要包括以下几个方面：常规准备：细胞培养基，胎牛血清，无菌操作器具等；细胞分离：将细胞悬浮液通过培养基离心分离并为单一细胞状态；细胞计数：使用细胞计数板，显微镜等设备检测细胞浓度；接种细胞：将细胞悬浮液加入预处理好的培养器皿中；细胞培养及维护：放到合适的培养环境中，进行有利的生长处理（悬浮细胞与贴壁细胞的处理方式各有区别）细胞检测及分裂：在一定时间内，对细胞进行检测，记录细胞数及细胞器发育情况；细胞使用或保存：细胞可以在需要时被收获，进行进一步的科研工作，或保存在液氮罐中，以备后续使用。进行细胞培养时，需要注意以下几点：确保无菌操作：细胞培养应在无菌环境下进行，必要时可使用生物安全柜进行操作；控制细胞温度：在适宜的器皿中提供恰当的温度，对于不同类型的细胞，温度和环境要求是不同的；细胞培养基成分：细胞培养基中有多种成分，一些有组分具有强烈的耗竭作用，应及时更换培养基以供养细胞；细胞处理方法：细胞处理时使用具有其细胞类型特异性的方法；合适的接种密度：不同类型的细胞要求不同密度的接种，过高或过低的细胞密度均会对细胞的生长和分裂产生不良影响；手套和口罩等保护操作：需要保护自己以及细胞免于污染和交叉感染。因此，在进行细胞培养时，需要细心、耐心和科学地操作，这样才能够顺利地进行和成功地完成细胞培养工作。

细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。细胞培养成功需注意三个方面：1）物质营养，体外培养细胞所需的营养是由培养基提供的。培养基中通常需要含有细胞生长所需的氨基酸、维生素和微量元素。其中最重要的是血清，含有促进细胞生长的生长因子。2）生存条件，体外细胞培养必须模拟体内生长环境，包括无菌环境、适宜的温度、一定的渗透压和气体环境（CO2和O2）3）废物代谢，培养基上细胞代谢产生的代谢物和废物累积在培养基中阻碍细胞的生长，所有应定期更换培养基。

⒈可以进行植物体外受精及 植物胚胎发育过程研究。⒉可以进行植物生长发育有关的重要基因或影响因素的研究。⒊可以方便地通过实验手段培育植物新品种

细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术.细胞培养的培养物可以是单个细胞,也可以是细胞群. 1.药物研究与开发 　　(1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究,中药有效成分筛选与鉴定等.　　(2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.　　(3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等.　　(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙,紫杉醇等生物活性成分研究与开发.　　(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体.2,生物制药 　　(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.　　(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素,粒细胞生长因子,胸腺肽等 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产 　　(4) 细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等

把一个细胞培养成多个细胞。

细胞培养的基本方法有贴壁培养、悬浮培养和固定化培养。贴壁培养主要适用于贴壁依赖性细胞。此类需要相互依赖，需贴附于不起化学作用的物质（玻璃或塑料等无活性物质）的表面生长、生存和维持，并最终在附着面生长至单层，铺满平面时便会发生接触抑制。来源于血液、淋巴组织的细胞，及许多肿瘤细胞（包括杂交瘤细胞）和某些转化细胞等属于悬浮培养型细胞，细胞为非贴壁依赖性细胞，无需支撑面，细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖。悬浮培养是大规模细胞培养的理想方式，可采用类似于微生物的方法进行悬浮培养。动物细胞较微生物脆弱，易受剪切力等的影响，而细胞固定化技术可较好的保护细胞免受机械力及环境变化的影响，提高细胞的耐受力，促使细胞高密度培养，提高目的产物的产率。

细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织。培养物是单个细胞或细胞群。培养时细胞在都必须生活在人工环境中，因为环境的改变，一些其他的因素可能会影响细胞的移动，使得细胞培养时间变长，传代细胞可能导致出现单一化。下面小编带你了解一下细胞培养技术的优缺点。细胞培养技术的优点1.细胞培养技术能够直接观察活细胞的生命活动与形态结构。在遗传学、细胞学、实验医学、肿瘤学和免疫学等多种学科被应用研究.2.细胞培养技术可以直接观察细胞的变化，方便得到影像。3.细胞培养技术可以研究细胞的类别很丰富。从低等到高等到人类，从胚胎到成年、从正常组织到肿瘤细胞。4.细胞培养技术在观察和研究细胞状况时能够很方便的运用相差、荧光、电镜、组化、同位素标记等各种技术方法。5.细胞培养技术既是分子生物学和基因工程学的组成部分，也是其主要的研究对象。6.细胞培养技术能够很方便的使用物理、化学生物的实验研究。7.细胞培养可以很方便提供大量生物性状相似的实验对象,而且花费很少，非常实惠。8.细胞培养是生物制品单克隆抗体生产和基因工程等的材料来源之一。细胞培养技术的缺点组织和细胞离体后必须独立生存在人工的培养环境中，虽然是模拟体内环境，但是和体内环境还是有很大的不同。 所以当利用培养细胞做实验时，不应该认为人工的培养环境等同于体内体内环境，轻易得出与体内相同的结果。

细胞的生长需要营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。培养基按其物理状态可分为液体培养基和固体培养基。液体培养基用于大规模的工业生产以及生理代谢等基本理论的研究工作。液体培养基中加入一定的凝固剂（如琼脂）或固体培养物（如麸皮、大米等）便成为固体培养基。固体培养基为细胞的生长提供了一个营养及通气的表面，在这样一个营养表面上生产的细胞可形成单个菌落。因此，固体培养基在细胞的分离、鉴定、计数等方面起着相当重要的作用。从多细胞生物中分离所需要细胞和扩增获得的细胞以及对细胞进行体外改造，观察，必须解决细胞离体培养问题，同微生物细胞培养的难易相比，比较困难的是来自多细胞生物的单细胞培养，特别是动物细胞的培养。细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。

1、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养工作包括：工作液配制、无菌操作(采样)、温育、无菌处理，细胞和用品贮存等。细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。2、常用设施及设备(1)超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。(2)无菌操作间：一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等。(3)操作间：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物品。(4)洗刷消毒间：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。(5)分析间：显微镜、计算机及打印机等。3、培养器皿细胞培养以玻璃器皿为主，常准备最需使用量的三倍。器皿应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面几种。(1)液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液、血清等液体，常以500ml、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替。(2)培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位，规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种。用于外周血培养的常用10ml普通圆瓶。两种培养瓶均要求选用优质玻璃制成。(3)培养皿：用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm等几种。(4)吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管，刻度吸管用于移动液体。常用1ml和10ml 两种。短吸管也叫滴管，分弯头和直头两种。(5)离心管：离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿，根据用途不同形态各样，常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为50ml、30ml、15ml;后者则多为10ml和5ml。(6)其它：如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等。

1、要保证实验材料新鲜，从活体分离材料后要注意低温保存。2、要保证无菌操作。可以在操作时用的培养液中加入平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。3、要注意酶液的浓度和控制消化时间。4、要注意培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。无菌操作、控制消化时间、及时关注细胞生长状态。

最基本的条件是无菌培养其次要有四个基本要素：水，碳源，氮源，无机盐根据不同的细胞种类，所需要的温度，pH，光照也不一样而不同的细胞还需要不同的激素，维生素（例如培养乳酸菌要加维生素C），不同的特定无机盐离子（例如水稻需要硅离子）空气：培养动物细胞要用95%空气加上5%二氧化碳（促进呼吸） 培养植物细胞只需通空气

1、能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响3、可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化（变异、分化）。可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。4、研究范围和细胞来源广泛，选择性广。5、不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。6、耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。

动物细胞培养原理是细胞增殖

原代细胞：处理组织，分离细胞，原代细胞培养，传代细胞系：细胞培养，传代可以体外培养增殖细胞，用于研究细胞功能、基因功能、疾病研究等科学研究，也可用于临床治疗

轻轻吹打,可先离心（1000rpm. 2,如要高浓度或需更换新培养基,新鲜培养基重悬沉淀,置培养瓶内轻轻摇晃: 1,吸的越干净越好,(根据配制强度经验),镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后. 一,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,50ml培养瓶加入消化液约0；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,以免中和后加入的消化液,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后继续进行传代、传代培养首先进行细胞复苏,使细胞基本成单个悬浮,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞细胞培养首先分为原代培养和传代培养、冻存,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化,晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,24h后换液.贴壁细胞.6ml,加入完全培养基继续培养、原代培养需要从组织中消化,去除血清和死细胞,轻轻吹匀后.悬浮细胞,加入完全培养基后继续培养或实验: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,加入2-3ml完全培养基后,适时换液,按此比例进行消化.PBS清洗2-3次,使强度减弱,使细胞均匀后置培养箱内培养: 1,5min左右）后加入完全培养基,完全培养基重悬培养. 2.先将水温锅调至37-38度.应遵守慢冻快融的原则；二、纯化出单细胞、分离. 细胞传代: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养

博凌科为生物科技-为你解答：组织培养 tissue culture从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下生存和生长并维持其结构和功能的方法。常用上皮组织:胚胎发育的内、中、外三个胚层均可分化成上皮组织。细胞形态较为规则，细胞间常以黏着物和特殊连接牢固相连。身体不同部位的上皮组织，所处的位置有着不同的功能，主要表现为保护、吸收、排泄和分泌等功能。分为被覆上皮、腺上皮、感觉上皮、生殖上皮和肌上皮等。上皮细胞浓度：（1～3）x105/ml成纤维细胞浓度：（2～6）x105/ml细胞培养 cell culture培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出 现单一化型。器官培养 organ culture器官培养：与组织培养条件相似，培养的是器官的原基，器官的一部分或整个器官，以便能够在体外生存、生长和保持一定功能的方法。

CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法）CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法）※准备 99DMEM培养基 99PBS(-) 99Trypsin（0.25％） 99MTX（100μM） 99移液管 99自动移液枪 99废液缸※培养基量 25c㎡99‥‥5ｍl 75c㎡99‥‥10ｍl※操作顺序 ①把培养瓶内的培养基用5ml的移液管转移到保存用的离心管里。 ②用培养液量的1/2的PBS（25ml‥2.5ml）清洗细胞表面（2次）。 ③再用培养液量的1/10的（25ml‥0.5ml）的胰酶冲洗细胞表面 ④再CO2培养厢里静置5分钟。（利用这段时间，准备好15ml的大离心管，并也好标签做好记号。） ⑤物理方法处理，（敲击培养瓶两侧）是细胞脱离，再用显微镜确认是否完全脱离。 ⑥加入等倍量的（25ml‥5ml）培养基，充分冲洗培养瓶内表面，在连同细胞全部转移到大离心管中。 ⑦离心分离（1,000rpm、4℃、10min）。（这段时间准备新的培养瓶，按照9/10的量（25ml‥4.5ml），加入培养液准备好。加入MTX的同时加入。）：　50nMMTX:2.5ulof100uM/final5ml培养液（这期间，要在培养瓶表面写上细胞培养的诸多条件和细胞的种类等等。） ⑧离心分离后，为了避免沉淀细胞扩散到溶液里，要迅速将上清用吸管吸除。 ⑨加入培养液(DMEM+FBS,25ml‥5ml)，用移液管充分混匀细胞。 ⑩按1/10量，（25ml‥0.5ml）将细胞悬浊液注入新培养瓶中。 76在CO2培养厢中37度条件下培养。培养液总量为5ｍｌ 注：使用的移液管为培养专用玻璃移液管，在上面吸口处，塞上棉花经过干热灭菌的。干热条件：180℃、3小时。 CHO细胞培养： CHO细胞株置于RPMI1640培养基中，内含10%灭活小牛血清，青霉素100IU/mL，链霉素100IU/mL，置于37℃，5%CO2的培养箱（德国Heraeus）中培养。每隔48h换培液，当单层培养细胞汇合以后，用0.25%胰蛋白酶消化，传代培养。将培养瓶中的CHO细胞按1×105/mL传代移入培养板中，待进入对数生长期后（约24h）加药。这是细胞的供给源: CHO细胞由中科院上海生物化学和细胞生物学研究所提供。 这是我对此细胞的看法: 1.CHO细胞主要来源于中华仓鼠卵巢细胞. 2.与3T3(鼠纤维细胞)293(HEK)COS(猴肾细胞)HepG2(人肝细胞)C2C12(鼠肌细胞)Hl5(昆虫)AFT024(鼠基质细胞)一起,是重组DNA的主要载体细胞,常见于基因工程. 3.培养基可有多种选择,一般用RPMI1640培养基或DMEM培养基.

细胞大规模培养系统主要有机械搅拌式培养系统，微载体培养系统，气升式深层培养系统，微囊培养系统，大载体培养系统，中空纤维培养系统，固定化细胞培养系统！

细胞原代培养和传代培养的区别原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。

原理 植物的全能性：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的全能性. 植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术.植物组织培养按其原始意义,就是指愈伤组织培养.但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养.因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术.它们的涵义是： 1．植株培养.指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）外植体的无菌培养. 2． 胚胎培养.指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养. 3． 器官培养.指以植物的根,茎,叶,花,果等器官为外植体的离体无菌培养,如根的根尖和切段,茎的茎尖,茎节和切段,叶的叶原基,叶片,叶柄,叶鞘和子叶,花器的花瓣,雄蕊（花药,花丝）,胚珠,子房,果实等的离体无菌培养. 4． 组织培养.指以分离出植物各部位的组织（如分生组织,形成层,木质部,韧皮部,表皮,皮层,胚乳组织,薄壁组织,髓部等）,或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养.这是狭义的组织培养. 5． 细胞培养.指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞,或花粉细胞,卵细胞）为接种体的离体无菌培养.

悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代贴壁细胞实验需准备超净台喷洒酒精，紫外照射30min。准备好培养瓶/皿，离心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，带上手套，口罩等，倒去旧培养基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉积的死细胞等。加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。加入1～2滴管含有血清的培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液。以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37℃CO2培养箱培养。细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。扩展资料：注意事项1、传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。2、每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。3、如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。参考资料：百度百科-传代培养

细胞共培养就是两种不同的细胞共同培养目的:共培养体系主要用于诱导细胞向另一种细胞分化，诱导细胞自身分化，维持细胞功能和活力，对细胞增殖进行调控，促进早期胚胎的发育和提高代谢产物的产量。

细胞生长要求更高，要求培养基包括生长因子，氨基酸，葡萄糖等营养成分，而细菌的主要营养成分就是蛋白胨，通过自身分解蛋白供能，而且细胞的生长培养基对pH要求更高。

不吃的剩菜剩饭，放着别动，几天就出来了

你想表达什么

细胞培养是指用体外培养的正常细胞，或者是导入外源基因的细胞，或者是利用由干细胞诱导分化而来的特定细胞，植入患者病变部位以代偿病变细胞丧失的功能。例如血液系统恶性肿瘤治疗时，通过放疗彻底杀灭肿瘤细胞，同时摧毁患者的造血系统，然后移植健康供者的骨髓，即人们常说的骨髓移植，就是最常见的细胞治疗。 　　人胚胎干细胞的建系为细胞治疗提供了更大的可能性。在利用胚胎干细胞作细胞治疗时，首先要考虑克服异体移植中的免疫排斥反应，其方法是将人胚胎干细胞进行MHC基因操作，建立可供移植对象配对选择的各种MHC组合的胚胎干细胞库。在这基础上，根据不同的移植对象和要求，或直接定向诱导分化为功能性细胞（如神经细胞、神经胶质细胞、软骨细胞等）；或定向诱导分化为组织干细胞（如造血干细胞、神经干细胞等），这类组织干细胞也可直接取材于成体组织或器官，最终植入患者病变部位。另一种途径是将患者的体细胞核导入去核卵细胞或去核胚胎干细胞，体外发育至一定阶段后，从中分离培养出供核患者专用的胚胎干细胞，再经诱导产生所需的分化类型的细胞，回输至供核患者，同样也避免了免疫排斥问题。

由于植物细胞具有全能性，即植物的体细胞具有母体植株全部遗传信息并发育成为完整个体的潜力，因而每一个植物细胞可以象胚胎细胞那样，经离体培养再生成植株。植物细胞的“全能性”学说是由1902年德国植物学家哈贝尔兰德提出的。他预言，人有朝一日可以切取植物的一小部分的叶、茎、根，使它们在试管中长成一株完整的植株。经过了长达35年之后，即1937年，美国科学家怀特等人第一次把胡萝卜和烟草植物体上的组织取下一块，放在试管里培育，终于长出新的细胞和组织。1958年，美国一位植物学家斯蒂伍德成功地从一个胡萝卜细胞，培养出了一株具有根、茎、叶的完整植物，并能开花结果。这样，哈贝尔兰德的科学预见终于变成了现实。美国宾夕法尼亚州立大学园艺学家认为，利用植物细胞和组织培养技术培养植物不但可行而且有利。它的好处是：可以避免用种子繁殖时发生的后代变异；可以得到无病害的植物，并且繁殖迅速，一年之内能生产数十万株植物；植物细胞可以放在塑料袋里邮寄，收到后把它放在温室瓶里培养，几天之后就能长成新的植物。特别是木本植物繁育周期长，从种子到下一代，往往需要几年，甚至几十年，如果用试管育苗的办法，对于缩短育种时间和保持植物优质将起到明显的作用。

博凌科为生物科技-为你解答：1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一。培 养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。2、优质血清目前大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最 重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生 物或有毒物质污染或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时必须保持细胞生存环境无菌无毒及时清除细胞代谢产物。4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长必须有恒定适宜的温度。5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一。所需气体主要有氧 气和二氧化碳。

细胞培养目的与用途有哪些，细胞培养，什么是细胞培能了解微生物的习性,细菌与某些疾病的关系.作用有:有些细菌可以制作药物,食品与生物塑料

细胞培养首先分为原代培养和传代培养. 原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存； 传代培养首先： 细胞复苏: 1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化. 2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液. 细胞传代: 1.贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验. 2.悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养. 具体更详细的你还是看看细胞培养的专业书吧!

轻轻吹打,可先离心（1000rpm. 2,如要高浓度或需更换新培养基,新鲜培养基重悬沉淀,置培养瓶内轻轻摇晃: 1,吸的越干净越好,(根据配制强度经验),镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后. 一,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,50ml培养瓶加入消化液约0；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,以免中和后加入的消化液,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后继续进行传代、传代培养首先进行细胞复苏,使细胞基本成单个悬浮,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞细胞培养首先分为原代培养和传代培养、冻存,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化,晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,24h后换液.贴壁细胞.6ml,加入完全培养基继续培养、原代培养需要从组织中消化,去除血清和死细胞,轻轻吹匀后.悬浮细胞,加入完全培养基后继续培养或实验: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,加入2-3ml完全培养基后,适时换液,按此比例进行消化.PBS清洗2-3次,使强度减弱,使细胞均匀后置培养箱内培养: 1,5min左右）后加入完全培养基,完全培养基重悬培养. 2.先将水温锅调至37-38度.应遵守慢冻快融的原则；二、纯化出单细胞、分离. 细胞传代: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养

细胞复苏可以推荐美国BioLife百奥莱的ThawSTAR系列细胞程序复苏仪Biolife百奥莱ThawSTAR细胞程序复苏仪细胞的存储与转运要在低温冻存条件下实现，细胞的提取与应用通常采用水浴的解冻复苏方式，而传统的水浴解冻复苏又面临着无法程序控制管理，人为的主观错误判断及水浴污染带来了一定的风险。2019年4月美国BioLife Solutions公司全资收购美国Astero公司及其细胞程序复苏知识产权，ThawSTAR 细胞程序复苏技术的高端机型开发得到了注资，其中CFT系列机型已经在各地生物药企、研发公司，高校科研单位，甚至医院实验室内均有使用，复苏效果得到了业内认可。上海朗喜工业科技有限公司作为Astero中国区合作伙伴，在中国大陆、香港及台湾销售Astero全系列产品。ThawSTARu2122 细胞程序复苏仪是一款细胞程序复苏的仪器。与传统的水浴操作相比，该仪器操作简单、重复性好，可有效避免操作过程中污染风险。由于仪器自动执行一系列程序复苏操作，因此排除了基于操作者主观推测因素造成的错误操作和污染的风险，再现性高！ThawSTARu2122 系统适用于干冰、-80℃冰箱、液氮等保存的冷冻细胞。操作简单，如，ThawSTAR CFT2 仅需要插入冻存管等待结束即可，处理完成时，冻存管会自动弹出。ThawSTARu2122 CFT 细胞程序复苏仪可以直接在生物安全柜BSC内进行工艺操作！

一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。四、冻存及复苏为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

细胞培养细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。 细胞培养技术的研究应用 1. 直接观察活细胞的形态结构和生命活动。用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究. 2. 直接观察细胞的变化可便于摄影。 3. 研究细胞种类如低等到高等到人类、胚胎到成体、正常组织到肿瘤。 4. 便于使用各种技术：相差、荧光、电镜、组化、同位素标记等方法观察和研究细胞状况。 5. 是分子生物学和基因工程学的研究对象，也是其主要的组成部分。 6. 易于施用物理、化学生物的实验研究。 7. 易于提供大量生物性状相似的实验对象,耗资少比较经济。 8. 成为生物制品单克隆抗体生产和基因工程等的材料来源。 细胞贴附在支持物表面生长，只依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞(Anchorrage-dependent cells)这种现象与细胞分化有关。

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1、无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。2、常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生毒素杀死细胞。真菌的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。3、一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。4、高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。5、细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。

细胞培养的概念：细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞培养成功的关键因素：1.要保证无菌,包括无菌操作,无菌环境.枪头等要及时灭菌,培养瓶,移液管最好使用一次性的,如果你的细胞比较不好养,最好使用一次性的.2.要传代的时候细胞传代的数量不能太少,否则细胞不容易养活.另外,传代不要过度频繁,即使是肿瘤细胞.3.不要经常用胰酶消化细胞,且消化时间不要过长.4.根据细胞生长情况,即使更换新鲜培养基.5.血清一般要冻存在-20摄氏度,用的时候在4摄氏度融化,不要反复冻存,最好用10ml的离心管分装使用.

1、无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。 2、常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生毒素杀死细胞。真菌的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。 3、一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。 4、高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。 5、细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。

1、能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响3、可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化（变异、分化）。可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。4、研究范围和细胞来源广泛，选择性广。5、不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。6、耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。

我们实验室养的sf9和BmN细胞。所用培养基为TC-100（粉末，按配方调成澄清溶液，灭菌，分装备用），分装时按10%比例加入灭活小牛血清，4度保存备用。细胞26度培养，每4天换一次培养基。 第二个我就不知道了

最重要的培养物质是动物血清(因为内含抗体)，环境是二氧化碳恒温培养箱(这里的二氧化碳起调节PH的作用，因为在培养过程中培养基的PH会发生变化，不利于细胞繁殖)

原理植物的全能性：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物的全能性。植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义，就是指愈伤组织培养。但发展至今，其范围日益扩大，已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此，拥有几种不同水平的培养技术，即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。它们的涵义是：1．植株培养。指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）外植体的无菌培养。2．胚胎培养。指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。3．器官培养。指以植物的根，茎，叶，花，果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖，茎节和切段，叶的叶原基，叶片，叶柄，叶鞘和子叶，花器的花瓣，雄蕊（花药，花丝），胚珠，子房，果实等的离体无菌培养。4．组织培养。指以分离出植物各部位的组织（如分生组织，形成层，木质部，韧皮部，表皮，皮层，胚乳组织，薄壁组织，髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的组织培养。5．细胞培养。指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。

动物细胞培养（animal cell culture）:从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。基本过程:取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。当培养超过50代时，大多数的细胞已经衰老死亡，但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性，即癌变。此时的细胞被称为细胞系。

细胞共培养就是两种不同的细胞共同培养目的：共培养体系主要用于诱导细胞向另一种细胞分化，诱导细胞自身分化，维持细胞功能和活力，对细胞增殖进行调控，促进早期胚胎的发育和提高代谢产物的产量。

两种贴壁细胞共同培养后怎样分离　　细胞培养（cell culture）细胞培养的含义，简单地说即是把来自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内的体外环境中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以观察细胞的生长、繁殖、衰老等生命现象。还可以利用细胞进行细胞工程与细胞癌变等重大问题的研究。细胞培养也是研究病毒与研制疫苗的基础技术。因此细胞培养技术在遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学、分子生物学等领域已得到广泛的应用。细胞培养分为原代培养和传代培养，下面介绍原代培养和传代培养的基本概念。　　原代培养 通过组织块直接长出单层细胞或用酶或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养，在首次传代前的培养可认为是原代培养。原代培养最大的优点是，组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，在一定程度上能反映体内状态。特别是在细胞培养会合时，原代培养的某些特殊功能表达尤为强烈。在这样的培养阶段能更好地显示与亲体组织紧密结合的形态学特征。在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下，采用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞分化等，效果很好。但应注意，原代培养组织是由多种细胞成分组成的，比较复杂。即使全为同一类型的细胞，如上皮细胞或成纤维细胞，也仍具有异质性，在分析细胞生物学特性时比较困难。其次，由于供体的个体差异及其他一些原因，细胞群生长效果有时也不一致。　　原代培养也是建立各种细胞系（株）必经的阶段。假如原代培养能够维持几小时甚至更长，即可进行进一步筛选。有的细胞具有继续增殖能力，有的细胞类型只是存活而不增殖，而另外一些细胞只是在特殊条件下应用而不存活，因而细胞类型的分布将会改变。在单层培养的情况下，瓶底全部铺满细胞，达到会合以后，对密度有依赖性的细胞则逐渐减少生长，而失去密度依赖敏感性的细胞则生长增加，天然或自发转化的细胞则过度生长。借助于频繁传代，保持细胞低密度生长，有利于保存细胞的正常表型（如小鼠成纤维细胞）。而自发转化则倾向于高细胞密度的过度生长。　　传代培养 原代培养形成的单层细胞汇合以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，都将影响细胞的生长，这一程序常称为传代或传代培养。原代培养在首次传代时即为细胞系，能连续培养下去的为连续细胞系；不能连续培养的为有限细胞系。通常，传代培养是指扩大培养，也就是将一份细胞一分为二或者一分为三进行培养等。但严格说来，不论稀释与否，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。可以理解，在任何时候，细胞从一个瓶子接种到另一个瓶子时总会丢失一部分，因此，在客观上细胞必定有所稀释。　　传代代数这一概念常常容易同“增殖代数”相混淆。细胞“一代”一词仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间。如某一细胞系为第153代，即指该细胞系已传代153次。它与细胞“增殖代数”（细胞世代或倍增）不同，在细胞一代中，细胞约能倍增3～6次。由此可见，细胞代数与增殖代数相关，确切的代数则依赖于细胞株和培养条件的不同而异。但构成一个细胞系的生长条件必须是同样的，因而细胞系应该表达近似的增殖代数或倍增代数。

不要远离酒精灯，不要靠近废液缸。东西不要用太久，经常高压。不要对朝着培养箱说话。操作中别说话，尽量少走动。瓶口不要打开太久。实验室条件和个人操作习惯都会导致污染，一般个人因素大一些

CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法） CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）培养方法（正统法） ※准备 DMEM培养基 PBS(-) Trypsin（0.25％） MTX（100μM） 移液管 自动移液枪 废液缸 ※培养基量 25c㎡‥‥5ml 75c㎡‥‥10ml ※操作顺序 ①把培养瓶内的培养基用5ml的移液管转移到保存用的离心管里. ②用培养液量的1/2的PBS（25ml‥2.5ml）清洗细胞表面（2次）. ③再用培养液量的1/10的（25ml‥0.5ml）的胰酶冲洗细胞表面 ④再CO2培养厢里静置5分钟.（利用这段时间,准备好15ml的大离心管,并也好标签做好记号.） ⑤物理方法处理,（敲击培养瓶两侧）是细胞脱离,再用显微镜确认是否完全脱离. ⑥加入等倍量的（25ml‥5ml）培养基,充分冲洗培养瓶内表面,在连同细胞全部转移到大离心管中. ⑦离心分离（1,000rpm、4℃、10min）.（这段时间准备新的培养瓶,按照9/10的量（25ml‥4.5ml）,加入培养液准备好.加入MTX的同时加入.）：　50nMMTX:2.5ulof100uM/final5ml培养液（这期间,要在培养瓶表面写上细胞培养的诸多条件和细胞的种类等等.） ⑧离心分离后,为了避免沉淀细胞扩散到溶液里,要迅速将上清用吸管吸除. ⑨加入培养液(DMEM+FBS,25ml‥5ml),用移液管充分混匀细胞. ⑩按1/10量,（25ml‥0.5ml）将细胞悬浊液注入新培养瓶中. 在CO2培养厢中37度条件下培养.培养液总量为5ml 注：使用的移液管为培养专用玻璃移液管,在上面吸口处,塞上棉花经过干热灭菌的.干热条件：180℃、3小时. CHO细胞培养： CHO细胞株置于RPMI1640培养基中,内含10%灭活小牛血清,青霉素100IU/mL,链霉素100IU/mL,置于37℃,5%CO2的培养箱（德国Heraeus）中培养.每隔48h换培液,当单层培养细胞汇合以后,用0.25%胰蛋白酶消化,传代培养.将培养瓶中的CHO细胞按1×105/mL传代移入培养板中,待进入对数生长期后（约24h）加药. 这是细胞的供给源: CHO细胞由中科院上海生物化学和细胞生物学研究所提供. 这是我对此细胞的看法: 1.CHO细胞主要来源于中华仓鼠卵巢细胞. 2.与3T3(鼠纤维细胞)293(HEK)COS(猴肾细胞)HepG2(人肝细胞)C2C12(鼠肌细胞)Hl5(昆虫)AFT024(鼠基质细胞)一起,是重组DNA的主要载体细胞,常见于基因工程. 3.培养基可有多种选择,一般用RPMI1640培养基或DMEM培养基.