工业微生物培养基的灭菌主要方法有哪些，灭菌后要达到什么要求

你说的是消毒。消毒和灭菌是不一样的的。灭菌的话只能用高压蒸汽灭菌锅或干热灭菌箱，药品只能消毒不能灭菌。 是多菌灵呜?

在121摄氏度持续加热15分钟，或者直接加热到沸腾保持半个小时也可以，能用三个星期不变质。

1、高压蒸汽灭菌:高压蒸汽灭菌适用于耐高温培养基、接种器具和蒸馏水的灭菌。培养基在配制过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，灭菌工作至少应在24小时内完成。一般可在0.105MPa压力、121℃温度下灭菌15 ~ 30分钟。消毒时间不能太长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物，特别是维生素，在高温下会分解，失去营养功能，使培养基变质、变色，甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水放入三角瓶中，含水量一般不超过瓶子的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包好密封，然后放入高压锅中灭菌，得到无菌水。灭菌后的培养基可以在培养室中预培养3天。如果没有污染，证明灭菌完成，可以使用。暂时不用的培养基最好保存在10℃下。含IAA或GA3的培养基应在一周内用完，其他培养基最多不超过一个月。2、过滤灭菌:一些植物生长调节剂和有机物质，如IAA、GA3、ZT、CM等。，加热时易分解，不能用培养基高温灭菌，所以要用细菌过滤器把杂菌过滤掉。细菌过滤器和滤膜(孔径0.45微米)在使用前应高压灭菌。过滤后的溶液应立即加入培养基中。如果是液体培养基，可以在培养基冷却到30℃时添加。如果是固体培养基，必须在培养基凝固前(50-60℃)加入，溶液必须摇匀，与其他成分混合均匀。

要根据你的培养基成分来选择灭菌方式。1.如果你的培养基中所有的成分都可以耐高温，那就用压力蒸汽高温灭菌的方式：121℃或者115℃30分钟。2.如果你的培养基中有些成分不耐高温，就可以用除菌过滤的方式除菌：用除菌滤器过滤培养基至已灭菌的培养器中。3.如何要求不高，部分试验用培养基，可以用煮沸的方式灭菌。不知你是哪种培养基。

题主是否想询问“工业生产中培养基灭菌方法有什么？”方法有高压蒸汽灭菌法、紫外线照射法、化学灭菌法。1、高压蒸汽灭菌法：将培养基装入培养瓶或压力锅中，采用高温高压的方法进行灭菌处理。这种方法适用于大批量生产和生产线连续生产的情况。2、紫外线照射法：利用紫外线对培养基进行照射，破坏细菌的DNA，从而达到灭菌的目的。这种方法适用于小批量生产和实验室使用的情况。3、化学灭菌法：使用化学物质如乙醛、过氧乙酸等对培养基进行消毒处理。这种方法适用于一些特殊的培养基或器具，比如生物危害较高的样品。

培养基灭菌是指杀灭培养基中的细菌、真菌、病毒等微生物，以保证培养基的纯度和无菌状态。一般用以下方法进行灭菌：1. 高压蒸汽灭菌法：是一种常用的灭菌方法，使用蒸汽锅对培养基进行高温高压灭菌。该方法可以迅速灭除细菌、孢子、病毒，且操作简便，效果显著。2. 高温烘箱灭菌法：是指将培养基在高温下进行烘干，以达到灭菌的效果。该方法操作简单易行，但是需要长时间的烘烤，会对一些温度敏感的营养成分造成不必要的影响。3. 紫外线辐射灭菌法：是指将紫外线辐射引入到培养基中进行灭菌。该方法一般用于灭除一些表面污染的菌群，对于内部微生物的灭杀效果相对较低。需要根据具体情况选择合适的灭菌方法，而在实验室中常见的做法是使用高压蒸汽灭菌法。

培养基配制好后，必须立即灭菌，因为如果长时间不进行灭菌，培养料内的微生物就会在料内发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制好菌的生长。培养基灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用，在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。扩展资料制备培养基的注意事项：1、在制备培养基的过程中，器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。2、同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。3、培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。4、培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。

基础培养基和含血清的培养基在进行消毒灭菌时需要采用不同的方法。对于基础培养基，可以采用高压蒸汽灭菌或者紫外线灭菌的方法。高压蒸汽灭菌是将培养基装入高压蒸汽灭菌器中，通过高温高压的蒸汽将其中的细菌、病毒等微生物灭菌。紫外线灭菌则是将培养基暴露在紫外线下，通过紫外线的辐射将其中的微生物灭菌。对于含血清的培养基，由于血清中含有丰富的营养物质，容易被微生物污染，因此需要采用更加严格的消毒灭菌方法。常用的方法包括过滤灭菌和辐照灭菌。过滤灭菌是将培养基通过0.22微米的滤膜过滤，将其中的微生物过滤掉，从而达到灭菌的目的。辐照灭菌则是将培养基暴露在辐射源下，通过辐射将其中的微生物灭菌。需要注意的是，在进行消毒灭菌时，应该选择合适的方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保培养基的质量和无菌性。同时，消毒灭菌后的培养基应该在无菌条件下保存，以免再次被污染。

培养基灭菌是用微波，紫外线，X射线，γ射线都可以进行灭菌的γ射线具有良好的灭菌和穿透力，能杀灭一切微生物，芽孢体也不例外。

要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30s。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。灭菌剂使用浓度(%)持续时间（min）去除的难易效果次氯酸钙9~105~30易很好次氯酸钠25~30易很好氯化汞0.1~15~8较难最好抗菌素4~50mg/L30~60中较好制备外植体将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。在操作中严禁用手触动材料。接种和培养（一）接种在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种1－2个，以防止交叉污染。（二）封口接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。（三）温度培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。增殖外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。根的诱导继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得键壮根系。组培苗的炼苗移栽试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。组织培养中的清洗、消毒灭菌技术日期：2010年4月1日来源：互联网作者：植物组培网点击：21901、清洗植物组织培养用的各种玻璃器皿，特别是培养瓶和盛培养基的器皿，一定要严格清洗，以防油污、重金属离子、酸、碱等有害物质残留在瓶内，影响培养物的生长。使用过的玻璃器皿应及时清洗，先将污物如培养基、培养物倒掉，再浸入水中，然后洗涤。玻璃器皿的洗涤，可根据器皿的污染程度和性质，采用不同的方法，通常有碱洗法和酸洗法。凡有微生物污染的器皿，必须先进行高压消毒和煮沸，以杀死菌体，否则会产生孢子飞扬，污染环境，给组织培养带来严重困难。器皿洗净后，应烘干或晾干，放在规定的地方，便于取用。常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用湿热灭菌（培养基）培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在o．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到O．05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0．1-0．15Mpa时，维持15-20min。u2022对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min。高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位。高压后培养基pH值的变化方向和幅度取决于多种因素。在高压灭菌前用碱调高pH值至预定值的则相反。培养基中成分单一时和培养基中含有高或较高浓度物质时，高压灭菌后的pH值变化幅度较大，甚至可大于2个pH值单位。环境pH值的变化大于0.5单位就有可能产生明显的生理影响。高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。在8%-20%蔗糖范围内，高压灭菌后的培养基约升高0．43倍。培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，可使15%-25%的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5，其水解量，培养基中添加0.1%活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1%活性炭，蔗糖水解率可达5%。灼烧灭菌（用于无菌操作的器械）u2022在无菌操作时，把镊子、剪子、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰卜灼烧火菌。冷却后，立即使用。操作中可采用250或500ml的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。干热灭菌（玻璃器皿及耐热用具）干热灭菌是利用烘箱加热到160-180~C的温度来杀死微生物。由于在干热条件下，细菌的营养细胞的抗热性大为提高，接近芽抱的抗热水平，通常采用170℃持续90min来灭菌。干热灭菌的物品要预先洗净并干燥，工具等要妥为包扎，以免灭菌后取用时重新污染。包扎可用耐高温的塑料。灭菌时应渐进升温，达到顶定温度后记录时间。烘箱内放置的物品的数量不宜过多，以免妨碍热对流和穿透，到指定时间断电后，待充分冷凉，才能打开烘箱，以免因骤冷而使器皿破裂。干热灭菌能源消耗太大，浪费时间。过滤灭菌（不耐热的物质）一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的，不能用高压灭菌处理，通常采用过滤灭菌方法。可用无菌的孔径0.20-0.45um的硝酸纤维素膜过滤菌类，当溶液通过滤膜后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出的溶液就是无菌溶液。紫外线和熏蒸灭菌（空间）u2022(1)紫外线灭菌在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌。紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，造成死亡。紫外线的波长为200—300nm，其中以260nm的杀菌能力最强，但是由于紫外线的穿透物质的能力很弱，所以只适于空气和物体表面的灭菌，而且要求距照射物以不超过1.2m为宜。(2)熏蒸灭菌用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。这种方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，房间关闭紧密，按5—8ml／m3用量，将甲醛置于广口容器中，加5g/m3高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。化学消毒剂的种类很多，它们使微生物的蛋白质变性，或竞争其酶系统，或降低其表面张力，增加菌体细胞浆膜的通透性，使细胞破裂或溶解。一般说来，温度越高，作用时间越长，杀菌效果越好。另外，由于消毒剂必须溶解于水才能发挥作用，所以要制成水溶状态，如升汞与高锰酸钾。还有消毒剂的浓度一般是浓度越大，杀菌能力越强，但石炭酸和酒精例外

因为培养基变质的速度太快了，微生物会呈指数型的增长。防止微生物分解培养基的成分，对营养成分早成损失和破坏，使得发生浑浊和腐坏，影响培养计数的结果，微生物在温热的培养基里生长非常迅速，半天的时间培养基就废掉了。

培养基的灭菌并不复杂,只需要区分培养基中的哪些成分是可以高温高压,哪些不需要.此外还需要控制温度.允许高温高压的成分在灭菌前配置好,高温高压灭菌即可（绝大多数成分可以直接高温高压灭菌）,部分成分高温高压后会导致其失效的应该在灭菌完成后加入,加入前可以用滤过除菌法灭菌.一般来说,糖发酵类和部分选择性高的培养基是在115度温度下灭菌,其他多数为121度.选择性非常强的培养基甚至只需要煮沸即可.1.首先将内层灭菌筒取出，再向外层锅加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。2.放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞，3.加盖，将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓。4.通电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。5. 灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。

培养皿一般是干热灭菌，一般用干热空气灭菌法：把培养皿用牛皮纸包好后放到干燥箱中170℃持续2h。培养基一般用湿热灭菌，一般用高压蒸汽灭菌锅：把培养基放到锥形瓶中，用绵塞和牛皮纸包好，放到高压蒸汽灭菌锅中，设置121℃持续20分钟。

原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料.由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等.另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压. 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质,是应用最广的凝固剂.加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化,于45℃以下凝固.但多次反复融化,其凝固性降低. 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌,以备纯培养用.一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌. 3材料 3.1器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱. 3.2药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液. 4流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板. 5步骤 5.1培养基的制备 5.1.1称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品,放入适当大小的烧杯中,琼脂不要加入.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速. 5.1.2溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中,在放有石棉网的电炉上小火加热,并用玻棒搅拌,以防液体溢出.待各种药品完全溶解后,停止加热,补足水分.如果配方中有淀粉,则先将淀粉用少量冷水调成糊状,并在火上加热搅拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,补足水分. 5.1.3调节pH 根据培养基对pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH.测定pH可用pH试纸或酸度计等. 5.1.4溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂.琼脂加入后,置电炉上一面搅拌一面加热,直至琼脂完全融化后才能停止搅拌,并补足水分(水需预热).注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦. 5.1.5过滤分装 先将过滤装置安装好（图3-1）.如果是液体培养基,玻璃漏斗中放一层滤纸,如果是固体或半固体培养基,则需在漏斗中放多层纱布,或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤.过滤后立即进行分装.分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口,以免浸湿棉塞, 引起污染.液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜.固体分装装量为管高的1/5,半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶,其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜. 5.1.6包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽,再包上一层防潮纸,用棉绳系好.在包装纸上标明培养基名称,制备组别和姓名、日期等. 5.1.7灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌.普通培养基为121℃20min,以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份.培养基经灭菌后,如需要作斜面固体培养基,则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2),斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后,垂直冷凝成半固体深层琼脂. 5.1.8倒平板 将需倒平板的培养基,于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板. 5.2灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类.本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌. 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种.通过加热使菌体内蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的.蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低.在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力. 5.2.1.高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法.这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的.当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时,水蒸气的温度升高到121℃,经15～30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢.一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌（图3-4）. 5.2.1.1操作方法和注意事项如下 加水 打开灭菌锅盖,向锅内加水到水位线.立式消毒锅最好用已煮开过的水,以便减少水垢在锅内的积存.注意水要加够,防止灭菌过程中干锅. 装料、加盖 灭菌材料放好后,关闭灭菌器盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,使蒸汽锅密闭,勿使漏气. 排气 打开排气口(也叫放气阀).用电炉加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出,当有大量蒸汽排出时,维持5min,使锅内冷空气完全排净. 升压、保压和降压 当锅内冷空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升.当压力上升至所需压力时,控制电压以维持恒温,并开始计算灭菌时间,待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃,20min）后,停止加热,待压力降至接近“0”时,打开放气阀.注意不能过早过急地排气,否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外. 灭菌后的培养基空白培养 灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养,经24h培养无菌生长,可保存备用；斜面培养基取出后,立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后,空白培养. 5.2.2干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌.一般是把待灭菌的物品包装就绪后,放入电烘箱中烘烤,即加热至160～170℃维持1～2h. 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌.凡带有胶皮的物品,液体及固体培养基等都不能用此法灭菌. 5.2.2.1灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染.常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌. 5.2.2.2干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内,注意不要摆放太密,以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触.将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h,注意勿使温度过高,超过170℃,器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧.如果是为了烤干玻璃器皿,温度为120℃持续30分钟即可.温度降至60～70℃时方可打开箱门,取出物品,否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂. 用此法灭菌时,绝不能用油、蜡纸包扎物品. 5.2.2.3火焰灭菌 直接用火焰灼烧灭菌,迅速彻底.对于接种环,接种针或其它金属用具,可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌.此外,在接种过程中,试管或三角瓶口,也采用通过火焰而达到灭菌的目的.

分装好培养基要及时用高压蒸汽灭菌如果采用自动定时灭菌，则开始灭菌时将下排气阀打开，待温度升至102℃左右时关上排气阀但要有一些排气，以保持锅内热的蒸汽循环一般常规灭菌都是在108千帕(121℃)时维持15~20分钟灭菌结束后，待压力降至49千帕时，可打开下排水阀使锅内压力降至常压后及时取出培养基，因为培养基中多数药剂是不耐长时间高温的

灭菌不是消毒

培养基的灭菌并不复杂，只需要区分培养基中的哪些成分是可以高温高压，哪些不需要。此外还需要控制温度。允许高温高压的成分在灭菌前配置好，高温高压灭菌即可（绝大多数成分可以直接高温高压灭菌），部分成分高温高压后会导致其失效的应该在灭菌完成后加入，加入前可以用滤过除菌法灭菌。一般来说，糖发酵类和部分选择性高的培养基是在115度温度下灭菌，其他多数为121度。选择性非常强的培养基甚至只需要煮沸即可。

培养基干粉是有菌的，配置好后，如果不及时灭菌，细菌就会大量繁殖，消耗营养成分，导致培养基失去原有作用，所以必须及时灭菌。不能及时灭菌就要放置在2-8度冰箱中贮藏，尽量即使高压灭菌。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。扩展资料物理分类液体培养基80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。固体培养基一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。半固体培养基指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。脱水培养基又称预制干燥培养基，指含有除水分外的一切成分的商品培养基。参考资料来源：百度百科——培养基

高压灭菌所采用的蒸汽压力与灭菌时间，应根据具体灭菌物质而定。液体培养基灭菌时，一般采用1.0Kg/cm2,温度121.30℃,灭菌30分钟

金属器具先用酒精擦拭,之后干热灭菌,使用时需烧灼；塑料可用高温灭菌；有机溶剂需用过滤灭菌；双手及操作台面可用酒精擦拭,台面及操作室还需紫外灭菌；培养基需用湿热高温灭菌,至于对待不同的培养基灭菌条件都有所不同,如植物组培使用的培养基与微生物中使用的就不同,具体的应查阅相关文献.

培养基都需要灭菌,但不是所有的都可以高温灭菌,如果培养基的营养物质高温会分解就不能使用高温灭菌,除此之外还有射线灭菌和化学物质灭菌等方法

一般培养基配置过程中就要开着灭菌锅，培养基配好后包扎，就放入灭菌锅了。书上说尽快灭菌，2小时以内，不要超过4小时。如果只是做简单的微生物培养，灭菌时间倒也不是那么重要的。但如果需要对微生物培养后做残糖分析，测定等最好立即灭菌。

没有说必须立刻灭菌。只不过是配置好以后用灭菌锅121度高压灭菌。特别是加了琼脂粉的培养基，只有这样的121度湿热灭菌才能让琼脂粉更好的溶解掉。

镊子、接种环、平皿、针头、可用干热灭菌法也就是用酒精灯烘烤也可用高压蒸汽灭菌法来灭菌。，普通培养基可用高压蒸汽灭菌法也就是用高压灭菌锅来灭菌。

培养基干粉是有菌的，配置好后，如果不及时灭菌，细菌就会大量繁殖，消耗营养成分，导致培养基失去原有作用，所以必须及时灭菌。如果怕高压不充分，培养基灭菌不彻底，可一每次多配置一小份同样的培养基，高压后将该培养基放置培养箱中，如果该小份培养基出现大量菌增殖现象，说明灭菌不充分，反之，则是无菌的。

那为什么配置MS培养基时先分装在灭菌呢

要检查培养基的灭效果方法非常简单,将培养基放在将要做实验的温箱中进行培养(时间与培养实验一致,一般是24小时)看灭菌后培养基的菌落就可以判断.有时也为了使用培养更加科学,在做细菌培养时,除在在涂上需要培养的菌种外,同时另外加一个培养基(空白)同时进行同条件培养进行对比.

因为，干燥灭菌的话会把培养基烘干。1．首先将内层锅取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角架相平为宜.2．放回内层锅,并装入待灭菌物品（内装培养基或小的三角瓶）,不要装得太挤,以免妨碍汽流通影响灭菌效果,三角瓶口不要与桶壁接触,以免冷凝水淋温包口的纸而透入棉塞.加盖,并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内,再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个棉栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气.3．用电炉或其他方法加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气,待冷空气排尽后,关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升,当锅内达到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间.4．停止加热,待压力表的压力降至零位时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品.注意：当压力不为零时,不能开盖取物否则由于压力突然下降,容器内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口,造成棉塞沾染而发生污染,甚至灼伤操作者.5．高压灭菌锅上的安全阀,是保障安全使用的重要机构,不得随意调节.

培养皿也是可以高压蒸汽灭菌的

主要包括以下三种：干热灭菌；湿热灭菌；紫外灭菌1.干热灭菌法1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达灭菌目的,火焰灭菌通常用于无菌操作中试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等实验物品的灭菌,防止管口污染。1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,在烤箱内加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃.此外降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底.2.湿热灭菌法通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,温度高,灭菌效果最好.注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.3.紫外线 杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜.

葡萄糖是二糖，你这不是误人子弟嘛。。高温会使葡萄糖变性，使培养基丧失营养成分。。

发酵过程中采用的灭菌方法、原理和条件采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，成为灭菌。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。可根据不同的需求，采用不同的方法，如培养基灭菌一般采用湿热灭菌，空气则采用过滤除菌 。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。方法概述灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。可根据不同的需求，采用不同的方法，如培养基灭菌一般采用湿热灭菌，空气则采用过滤除菌。热灭菌法热灭菌法利用高温使微生物细胞内的一切蛋白质变性，酶活性消失，致使细胞死亡。通常有干热、湿热和间歇加热灭菌等法。干热灭菌火焰灼烧法或烘箱内热空气灭菌法称为干热灭菌法(dryheatsterilization)。把金属器械或洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，可达到彻底灭菌(包括细菌的芽孢)的目的。灼烧(incineration或combustion)是一种最彻底的干热灭菌法，应用范围仅限于接种环、接种针的灭菌或带病原菌的材料、动物尸体的烧毁等。湿热灭菌以沸水、蒸气和蒸气加压灭菌。巴氏消毒法：因最早由法国微生物学家巴斯德用于果酒消毒，故名。这是一种专用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒方法[1] 。巴氏灭菌法就是湿热灭菌，此法有两种方式[1] ，①经典的低温维持法(lowtemperatureholdingmethod，LTH)：在61.7～62.8℃下处理30分钟;②较现代的高温瞬时法(hightemperatureshorttime或flushpoint，HTST)：在71.6℃或略高温度下处理15分钟。在上述诸法中，以蒸气加压灭菌效果最好，可用常压蒸气灭菌，也可在高压蒸气锅中(一般使用1千克/厘米2)灭菌,其蒸气温度可达121℃,能将耐热的芽孢在30分钟内全部杀死。但对某些易被高压破坏的物质，如某些糖或有机含氮化合物，宜在0.6千克/厘米2压力下(110℃)灭菌15～30分钟。煮沸消毒法：采用在100℃下煮沸数分钟的方法，一般用于饮用水的消毒[1] 。间歇灭菌间歇灭菌连续3天,每天进行一次蒸气灭菌的方法。此法适用于不能耐 100℃以上温度的物质和一些糖类或蛋白质类物质。一般是在正常大气压下用蒸气灭菌 1小时。灭菌温度不超过100℃,不致造成糖类等物质的破坏，而可将间歇培养期间萌发的孢子杀死，从而达到彻底灭菌的目的。辐射灭菌辐射灭菌在一定条件下利用射线进行灭菌的方法。较常用的有紫外线，其他还有电离辐射(射线加快中子等)。波长在25000～80000纳米之间的激光也有强烈的杀菌能力,以波长26500纳米最有效。辐射灭菌法仅限于某一定材料，因所需设备复杂，难于广泛使用。渗透压灭菌渗透压灭菌利用高渗透压溶液进行灭菌的方法。在高浓度的食盐或糖溶液中细胞因脱水而发生质壁分离，不能进行正常的新陈代谢，结果导致微生物的死亡。化学试剂灭菌大多数化学药剂在低浓度下起抑菌作用,高浓度下起杀菌作用。常用5%石炭酸、70%乙醇和乙二醇等。化学灭菌剂必须有挥发性，以便清除灭菌后材料上残余的药物。化学灭菌常用的试剂有表面消毒剂、抗代谢药物(磺胺类等)、抗生素、生物药物素抗生素是一类有微生物或其他生物生命活动过程中的合成的次生代谢产物或人工衍生物，他们在很低浓度时就能抑制或感染它种生物(包括病原菌，病毒，癌细胞等)的生命活动，因而可用作优良的化学治疗剂。

微生物培养基一般都可以高压灭菌 细胞培养基很多都不能高压灭菌 只能过滤除菌

培养基的配制与灭菌 1目的 1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法 1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 2原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 3材料 3.1器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 3.2药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 4流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 5步骤 5.1培养基的制备 5.1.1称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 5.1.2溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 5.1.3调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 5.1.4溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 5.1.5过滤分装 先将过滤装置安装好（图3-1）。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 5.1.6包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 5.1.7灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2)，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 5.1.8倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板。 5.2灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 5.2.1.高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌（图3-4）。 5.2.1.1操作方法和注意事项如下 加水 打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖 灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 排气 打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压 当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养 灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。 5.2.2干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 5.2.2.1灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。 5.2.2.2干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。 5.2.2.3火焰灭菌 直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。 6结果 6.1记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件（温度、压力等）。 6.2试述高压蒸汽灭菌的过程及注意事项。 7思考 7.1制备培养基的一般程序是什么？ 7.2做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？ 7.3灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义？ 4试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。 5高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？

细菌和真菌的生活需要一定的条件，如水分、适宜的温度、还有有机物．因此首先要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制，然后把培养基和所有用具进行高温灭菌，目的是杀死培养基和培养皿中的细菌和真菌，以防杂菌对实验的干扰，以免影响实验结果；为防止高温杀死细菌、真菌，要等冷却后，在进行接种，接种后放在温暖的地方进行恒温培养．注意：定期观察并详细记录实验现象．故选：B

你好灭菌是杀灭培养基中本身的原著菌或在空气中附着的杂菌,更好的让目标菌生长(减少杂菌消耗培养基中的营养,而且有些杂菌会抑制你目标菌的生长).一般灭完菌后将培养基放在30-37度的环境中培养一天,看其有没有长菌(液体看是否变浑浊,固体看是否长菌落),即知是否灭菌后为无菌.

刚做好的PDA培养基倒入三角瓶中，每瓶加三分之一的量（最多不要超过二分之一），封口膜封口，外面再用旧报纸包裹，用绳子或橡皮筋捆绑好，放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，一般设置温度为121℃，时间为20~25min。PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即PotatoDextroseAgar（Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。

培养基的灭菌方法 1、高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。2、过滤灭菌：一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。

培养基配制好后，必须立即灭菌，因为如果长时间不进行灭菌，培养料内的微生物就会在料内发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制好菌的生长。培养基灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用，在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。扩展资料制备培养基的注意事项：1、在制备培养基的过程中，器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。2、同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。3、培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。4、培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。

高压灭菌。灭菌是杀灭培养基中本身的原著菌或在空气中附着的杂菌，更好的让目标菌生长(减少杂菌消耗培养基中的营养，而且有些杂菌会抑制目标菌的生长)，一般灭完菌后将培养基放在30-37度的环境中培养一天，看其有没有长菌(液体看是否变浑浊，固体看是否长菌落)，即知是否灭菌后为无菌。扩展资料：注意事项：培养基的加热溶解或高温灭菌盛放使用的容器不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时搅动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还须用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。参考资料来源：百度百科-培养基

因为培养基配置过程中，已经有大量的细菌，酵母菌，霉菌等混入培养基中，如果不及时灭菌，会消耗掉培养基中的能源物质。如果你的培养基做定量分析的话，会很有影响的。当然，如果你只是单纯的培养常见的菌种，对培养基要求较低，也不一定就要必须立即灭菌的。

怎么对培养基灭菌？分装好培养基要及时用高压蒸汽灭菌如果采用自动定时灭菌，则开始灭菌时将下排气阀打开，待温度升至102℃左右时关上排气阀但要有一些排气，以保持锅内热的蒸汽循环一般常规灭菌都是在108千帕时维持15~20分钟灭菌结束后，待压力降至49千帕时，可打开下排水阀使锅内压力降至常压后及时取出培养基，因为培养基中多数药剂是不耐长时间高温的微生物培养需要对培养基采用什么方法进行灭菌高温灭菌。在实验室，是把配制好的培养基放在封闭的容器中，放到高压灭菌锅中灭菌。在生产中，是把配制好的培养基放在封闭的大型设备中，在外面的夹套或内部的盘管中通入高压蒸汽，加热里面的培养基灭菌。产生灭菌效果的不是高压，而是高压产生的高温。高温使微生物死亡。培养基用什么方法灭菌用湿热灭菌：蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。湿热灭菌的效果，取决于致死温度和致死时间。致死温度是杀灭微生物的极限温度。一些抗生素及有机物等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌，例如含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基。

培养基的灭菌流程如下：1、使用前在外层锅内加入适量的水，水量与三角搁架相平；2、将内锅放在三角搁架上，培养基分装完毕后将待灭菌的物品放在内锅里，将盖上的排气软管插到内锅的排气槽内，然后将锅四周的固定螺旋以两两对称的方式旋紧，打开排气阀；3、加热井的同时打开排气阀，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，维持5分钟以上，然后将排气阀关闭；4、当压力升至0.1兆帕，温度达到121摄氏度时，维持20到30分钟后，隔断热源；5、出锅当压力表降至零处后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物；?6、灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，保持内壁及搁架干燥，盖好锅盖即可。

防止微生物分解培养基的成分，对营养成分早成损失和破坏，使得发生浑浊和腐坏，影响培养计数的结果，微生物在温热的培养基里生长非常迅速，半天的时间培养基就废掉了。

1.灼烧灭菌将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。2.干热灭菌将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2h可达到灭菌的目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。3.高压蒸汽灭菌将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内。把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，继续加热使锅内的气压逐步上升，温度也随之升到100℃以上。为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15~30min。

培养基在高温下会碳化结焦，破坏营养成分。任何培养基灭菌时间越长或重复灭菌都对微生物的生长有不良影响。 重复灭菌会造成培养基中营养成分的损失，当然灭菌后也能用。如果你的实验要获取产物就重配吧，只是培养菌体也能长起来。

培养皿灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌，干热灭菌方法：包在铁质容器内，进行高温烘烤．湿热用牛皮纸包起来放在高压锅中进行高压灭菌。 培养基灭菌方法有湿热灭菌、煮沸灭菌和过滤除菌，煮沸灭菌在电磁炉或者微波炉内进行煮沸即可，过滤除菌适用于不能高温处理的培养。

使培养基接种后彻底灭菌的方法。使培养基谢中后彻底霉菌的方法有很多。

培养基配制完成后，必须立即灭菌原因是防止细菌污染培养基。一旦细菌污染了培养基，由于培养基有丰富的营养物质，细菌会段时间内大量产生，就会跟培养物争夺营养物质，另一方面，细菌生长过程中会产生有毒物质致使培养物死亡，若不能即时灭菌必须重新进行无菌无毒操作。一般在比较成熟的情况下，会在培养基高压蒸汽灭菌前调高一定的pH值，以便适应灭菌后pH值下降的问题，具体调高多少可根据自身实验摸索。扩展资料：分装时要掌握好分注量，多了即浪费又减小培养物的生长空间;少了又会因营养不足而影响生长，一般以占培养容器1/4 - 1/3左右为宜，培养基在培养容器中的厚度约为1.5cm。分装时要注意不要将培养基沾到管壁上，以免引起污染。分装后立即塞上棉塞或者盖上瓶盖或封好封口膜，并在培养瓶上贴标签或用记号笔在瓶壁上作好标注，然后进行灭菌。

培养基干粉是有菌的，配置好后，如果不及时灭菌，细菌就会大量繁殖，消耗营养成分，导致培养基失去原有作用，所以必须及时灭菌。如果怕高压不充分，培养基灭菌不彻底，可一每次多配置一小份同样的培养基，高压后将该培养基放置培养箱中，如果该小份培养基出现大量菌增殖现象，说明灭菌不充分，反之，则是无菌的。搜索杀菌小妙招100个无菌技术培训视频杀灭一切微生物的方法尿细菌培养怎样看结果真菌最好的培养方法固体酵种培养的方法