硫酸铵分级沉淀的浓度

　　硫酸铵是沉淀。硫酸铵为无色结晶或白色颗粒。无气味。280℃以上分解。水中溶解度：0℃时70.6g，100℃时103.8g。不溶于乙醇和丙酮。0.1mol/L水溶液的pH为5.5。相对密度1.77。折光率1.521。硫酸铵主要用作肥料，适用于各种土壤和作物。还可用于纺织、皮革、医药等方面。 　　沉淀（precipitation）是将溶液中的目的产物或主要杂质以无定形固相形式析出再进行分离的单元操作。沉淀法有等电点沉淀法、盐析法、有机溶剂沉淀法等。

在蛋白质溶液中加入硫酸铵，会使得蛋白质的溶解度下降，因而沉淀出来。很多人利用这种方法来进行蛋白的粗纯，即通过收集蛋白沉淀，丢弃溶液中非蛋白的干扰物质，最后再将蛋白沉淀溶解，从而得到粗纯的蛋白。可以参考：http://wenku.baidu.com/link?url=QPn-FUzArPepBbGL1luIEIOg8Br5pa_ifCrsGWhxuWlPGrPyqHAyHnCOwYPKhHiXJvaz5JMiQjwaz4Jo51GbykOLdwfPANy0N0dm7SKwOQu 里面的信息。

溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。扩展资料：硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4、SO离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性。因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。

一， 基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

盐析是通过向蛋白质溶液中加入高浓度中性盐(如硫酸铵)，致使蛋白质发生沉淀的蛋白质分离技术。盐析作用主要是由于大量中性盐的加入使水的活度降低，不仅原来溶液中的大部分水转变为盐离子的水化水，而且蛋白质分子表面通过静电作用结合的水化层也被移去以溶剂化盐离子，使蛋白质分子表面的疏水残基充分暴露，从而发生聚集而沉淀下来。盐溶指的是加入盐，使物质溶解度增加。(NH4)u2082SO4用作沉淀剂的优点是：因为它是二价离子中性盐，而且在水中溶解度很高，溶解度的温度系数也较低，故能在低温下(4°C)以高浓度存在，争夺溶液中的水以及蛋白质分子表面的水化水，使蛋白质溶解度有效降低，从而使蛋白质在保持活性的情况下从溶液中沉淀出来。

、硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。

沉淀反应至少应在50mm/L缓冲液中进行。在硫酸铵分级沉淀蛋白质的注意事项有沉淀反应至少应在50mm/L缓冲液中进行，是为了平衡硫酸铵溶解时产生的轻微酸化作用。硫酸铵是一种无机物，化学式为(NH4)2SO4，无色结晶或白色颗粒，无气味。280℃以上分解。

硫酸铵沉淀后的蛋白通过透析除盐。除了透析除盐外，还有什么方式可以除去硫酸铵采用有机溶剂沉淀溶液中的硫酸铵这种方法，比较少见，主要是有机溶剂容易是蛋白质变性。想去除溶液中的硫酸铵，方法较多。去除蛋白质溶液中的硫酸铵，一般采用透析去除溶液中的硫酸铵，或者采用超滤去除硫酸铵。

硫酸铵可能会损坏某些蛋白。加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀。对于常规可再生的纯化过程，可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析。通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效。沉淀所需溶液：饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵，搅拌溶解）。1M Tris-HCl，pH 8.0用于第一步纯化的缓冲液。方法：1，过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）。2，每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl，pH 8.0以维持pH值。3，温和搅拌。逐滴加入硫酸铵溶液，最高至50%饱和度。搅拌1小时。4，10000g离心20min。5，去除上清，用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次。再次离心。6，使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀。7，硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去。

因为硫酸是电解质,胶体会聚沉但一旦过量硫酸会溶解注意，滴入硫酸铵只沉淀不会溶解!!!因为Fe3+水解能力很强，相当于中强酸(比醋酸还强)Fe3+水解能力远强于NH4+Mg(OH)2可溶于硫酸铵因为Mg2+与NH4+水解能力相差不大

氢氧化铁不与硫酸铵反应

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。硫酸铵不是重金属盐，不会使得蛋白质变质蛋白质的盐析。硫酸铵浓溶液可降低蛋白质的溶解。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。硫酸铵不是重金属盐，不会使得蛋白质变质蛋白质的盐析。硫酸铵浓溶液可降低蛋白质的溶解度使蛋白质脱水凝聚而盐析。这个过程是物理变化，不是化学变化，蛋白质分子没有改变。向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物（胶体）。盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂,这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强。它使溶液中自由水分子数减小,从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结晶析出，这就是盐析结晶。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。比如在蛋白溶液中加入高浓度的硫酸铵使蛋白质溶解度降低而析出的过程。很多中性盐都可以使蛋白质发生盐析，比如硫酸铵，氯化钠等等。

根据课本知识可知：向鸡蛋清中加入饱和硫酸铵溶液，可以观察到的现象为析出沉淀，说明饱和硫酸铵溶液可使蛋白质的溶解性变小，此过程叫做蛋白质的“盐析”为物理变化．蛋白质受热或遇到浓硝酸、重金属盐、甲醛等化学物质，会发生化学变化

jiandan

如何区分蛋白质变性沉淀和硫酸铵盐稀发生沉淀原理就是溶液中的离子强度不同时,不同蛋白质的溶解度不同,步骤就是不断加硫酸铵以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀,再加到浓度50%时球蛋白沉淀,饱和时清蛋白沉淀基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质.用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法.高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质.这种方法称之为盐析.盐浓度通常用饱和度来表示.硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广.

溶液中的离子强度不同时,不同蛋白质的溶解度不同.高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来. 各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质.这种方法称之为盐析.硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广. 加入饱和硫酸铵溶液,使蛋白质在水中的溶解度降低,所以蛋白质会从水中析出,这叫“盐析”. 可以理解成硫酸铵与水结合能力更强，使蛋白质的疏水基暴露出来因此溶解度降低。还有一点是硫酸铵是盐类，强电解质，会抑制弱电解质蛋白质的解离，使蛋白质带电减少

铵离子特别活跃，当硫酸铵少时水会溶解它，量到达一定程度，水的能力不够了就不能溶解了，和氯化钠溶解差不多

硫酸铵沉淀的蛋白用硫酸铵溶解。根据查询相关资料信息显示，硫酸铵沉淀的蛋白在80%饱和硫酸铵浓度下，会溶解，硫酸铵最大溶解量约为76。

根据课本知识可知：向鸡蛋清中加入饱和硫酸铵溶液，可以观察到的现象为析出沉淀，说明饱和硫酸铵溶液可使蛋白质的溶解性变小，此过程叫做蛋白质的“盐析”为物理变化．蛋白质受热或遇到浓硝酸、重金属盐、甲醛等化学物质，会发生化学变化，失去原有的生理功能，此过程叫做蛋白质的“变性”．因此，重金属盐、甲醛能使人中毒，若少量的重金属盐中毒，可以吞服蛋白质来解毒．蛋白质烧焦后有烧焦羽毛的气味，这个性质可以用来鉴别蛋白质，区分蚕丝和棉纱线的方法如下：将蚕丝和棉纱线分别点燃，有烧焦羽毛气味的是蚕丝，另一种是棉纱线．故答案为：析出沉淀；变小；物理；热；浓硝酸；重金属盐；甲烷；化学；蛋白质；烧焦羽毛；将蚕丝和棉纱线分别点燃，有烧焦羽毛气味的是蚕丝，另一种是棉纱线．

不是！

蛋白质作为溶液稳定存在的两大因素：一是蛋白质颗粒表面大多为亲水基团，可吸引水分子，使颗粒表面形成一层水化膜，从而阻断蛋白质颗粒的相互聚集，防止溶液中蛋白质的沉淀析出；二是蛋白质颗粒表面可带相同电荷颗粒之间相互排斥不易聚集沉淀，也可以起稳定颗粒的作用。若去除蛋白质颗粒这两个稳定因素，蛋白质极易从溶液中沉淀。盐析是一种与蛋白质的沉淀的性质相关的分离方法：它用硫酸铵、硫酸钠等中性盐来破坏蛋白质在溶液中稳定存在的两大因素，故能使蛋白质发生沉淀。不同蛋白质分子颗粒大小不同，亲水程度不同，故盐析所需要的盐浓度不同，从而将蛋白质分离，如用硫酸铵分离清蛋白和球蛋白，在半饱和的硫酸铵溶液中，球蛋白即可从混合溶液中沉淀析出除掉，而清蛋白在饱和硫酸铵中才会沉淀。盐析的优点是不会使蛋白质发生变性。

因为硫酸铵能降低蛋白质在溶液中的溶液解，使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种现象叫做盐析，属于物理变化，加水稀释后又可复原。

不一定，各种抗体盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同，一般情况是在30%到50%饱和度的硫酸铵可以将抗体沉淀出来。为了达到最好的分离纯化效果，先从低饱和度的硫酸铵加起，分级沉淀出抗体。

2个小时。硫酸铵沉淀蛋白是各种蛋白质的溶解度不同，是有2个小时的，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质，这种方法称之为盐析。

似乎是因为铵根过量时会结合成络合离子，这些络合离子的溶解度一般很高，所以沉淀又变可溶了。你问一下老师吧，任课老师不说你就去化学组，总有人爱你虚心好学，细细解释的。

a淀粉酶是曲霉或者酵母产生的，产生的a淀粉酶溶于水中，经过过滤，得到a淀粉酶的水溶液，经过浓缩得到含有不同单位浓度的a淀粉酶成品溶液。得到的a淀粉酶溶液中还是含有大量的杂质。一般不影响使用，如果要进一步提纯，可以在粗酶液中添加饱和的硫酸铵溶液，淀粉酶从溶液中沉淀出来，用高速离心机进行离心，淀粉酶沉淀在容器底部，倒掉上层的清液，生在容器底部的酶就是比较纯的淀粉酶了。不过用硫酸铵分级后得到的淀粉酶，内部含有硫酸铵，用定氮法无法准确测量酶的含量。可以用钼酸铵法来进行测量。

10mS/cm。硫酸铵是一种化学溶液，在化学实验中有重要作用，而经过沉淀复溶后，本身的电导率达到了10mS/cm。电导率是物理学概念，也可以称为导电率，是用来描述物质中电荷流动难易程度的参数，在介质中该量与电场强度E之积等于传导电流密度J。

网上有关硫酸铵饱和度的数据表是一个参考，但是和实际值没有太大的出入，你在冰上进行操作，就是按照4度时的饱和度。一般不会再室温下加入硫酸铵。加硫酸铵是可以配制成饱和溶液加入你所要沉淀的蛋白样品中（一般是在低饱和度就可以将蛋白沉淀时使用），或者直接加入硫酸铵固体，直到你所需要的饱和度。加入硫酸铵后最好不要过滤，因为到一定的饱和度时，会有蛋白沉淀，你过滤的话会将沉淀的蛋白一起过滤掉。

中性盐。中性盐加入硫酸铵蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。硫酸铵是一种无机物，化学式为(NH4)2SO4，纯品为无色透明斜方晶系结晶。硫酸铵水溶液呈酸性，不溶于醇、丙酮和氨水，有吸湿性，吸湿后固结成块。

能，这是盐析现象是可逆的，可以重新溶于水当加入的是重金属盐，酒精，丙酮，强酸，强碱，超声波，加热等等这就会使蛋白质的空间结构发生改变，使其变性不可逆了，不能重新还原为原来的状态

硫酸钠。当我们进行硫化反应化学实验时发现硫酸铵与硝酸钠反应会产生硫酸钠，硫酸钠是一种固态的白色沉淀，有毒不要随意触碰。

为什么白明胶加硫酸铵加水沉

盐析的问题吧可以的，根据cohn经验方程，lgS=b-KI式中S为溶解度，b为盐浓度0时溶解度，K为盐析常数，I为离子强度K和盐种类相关，I和盐浓度相关，只要KI够大，就能把溶解度降低pH处于等电点是为了降低b，但不是必须条件

氯化镁和硫铵会沉淀吗答：会。氯化镁和硫铵会沉淀

硫酸铵可能会损坏某些蛋白.加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀. 对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析. 通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效. 沉淀所需溶液： 饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解）. 1M Tris-HCl,pH 8.0 用于第一步纯化的缓冲液. 方法： 1,过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）. 2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值. 3,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度.搅拌1小时. 4,10000g离心20min. 5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次.再次离心. 6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀. 7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去.

抗体的纯化(硫酸铵沉淀法）一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。二，试剂及仪器1.组织培养上清液、血清样品或腹水等2.硫酸铵（NH4）SO43.饱和硫酸铵溶液（SAS）4.蒸馏水5.PBS(含0.2g/L叠氮钠)6.透析袋7.超速离心机8.pH计9.磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）1.将767g（NH4）2SO4边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1mol/L,25°C）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20000′g离心30min，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。（三）透析1.蛋白质溶液10000′g离心30min（4°C）。弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。四，应用提示（一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。1.边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1(v/v)；2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；3.3000′g离心30min（4°C），保留上清液；上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；4.上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

盐析。能够和蛋白质分子结合而抵消静电力

1、硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。 2、各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

1、硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。 2、各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

抗体的纯化(硫酸铵沉淀法）一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。二，试剂及仪器1.组织培养上清液、血清样品或腹水等2.硫酸铵（NH4）SO43.饱和硫酸铵溶液（SAS）4.蒸馏水5.PBS(含0.2g/L叠氮钠)6.透析袋7.超速离心机8.pH计9.磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）1.将767g（NH4）2SO4边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1mol/L,25°C）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20000′g离心30min，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。（三）透析1.蛋白质溶液10000′g离心30min（4°C）。弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。四，应用提示（一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。1.边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1(v/v)；2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；3.3000′g离心30min（4°C），保留上清液；上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；4.上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀…一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。二，试剂及仪器1.组织培养上清液、血清样品或腹水等2.硫酸铵（NH4）SO43.饱和硫酸铵溶液（SAS）4.蒸馏水5.PBS(含0.2g/L叠氮钠)6.透析袋7.超速离心机8.pH计9.磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）1.将767g（NH4）2SO4边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1mol/L,25°C）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20000′g离心30min，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。（三）透析1.蛋白质溶液10000′g离心30min（4°C）。弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。四，应用提示（一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。1.边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1(v/v)；2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；3.3000′g离心30min（4°C），保留上清液；上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；4.上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀…一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。二，试剂及仪器1.组织培养上清液、血清样品或腹水等2.硫酸铵（NH4）SO43.饱和硫酸铵溶液（SAS）4.蒸馏水5.PBS(含0.2g/L叠氮钠)6.透析袋7.超速离心机8.pH计9.磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）1.将767g（NH4）2SO4边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1mol/L,25°C）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20000′g离心30min，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。（三）透析1.蛋白质溶液10000′g离心30min（4°C）。弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。四，应用提示（一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。1.边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1(v/v)；2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；3.3000′g离心30min（4°C），保留上清液；上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；4.上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

因为硫酸铵能降低蛋白质在溶液中的溶液解，使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种现象叫做盐析，属于物理变化，加水稀释后又可复原。

原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。试剂及仪器1.组织培养上清液、血清样品或腹水等2.硫酸铵（NH4）SO43.饱和硫酸铵溶液（SAS）4.蒸馏水5.PBS（含0.2g/L叠氮钠）6.透析袋7.超速离心机8.pH计9.磁力搅拌器操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%50%。（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）1.将767g（NH4）2SO4边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1mol/L,25°C）。2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20000′g离心30min，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。（三）透析1.蛋白质溶液10000′g离心30min（4°C）。弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS-0.2g/L叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。应用提示（一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。1.边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1（v/v）；2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；3.3000′g离心30min（4°C），保留上清液；上清液再加SAS到0.5:1（v/v），再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；4.上清液再加SAS到0.5:1（v/v），再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

抗体的纯化 ( 硫酸铵沉淀法）一， 基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 二， 试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 ) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三， 操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ） 1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水） 20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为 1 ： 1 （ 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。 （三）透析 1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时（ 4 ° C ），每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一） 先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加 SAS 到样品溶液中，使浓度为 0.5:1 (v/v) ； 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时 或过夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效 （二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表 1 ）；硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀…

1、硫酸铵浓度的计算就根据硫酸铵饱和度表来计算，比如60%的硫酸铵就是指体系中硫酸铵的浓度达到同温度下硫酸铵饱和浓度的60%，这个和硫酸铵的摩尔浓度没有关系。2、直接根据饱和度表在蛋白溶液中加入适当重量的固体硫酸铵即可。3、硫酸铵的饱和度随着温度有少许变化：0度时，每升水可以溶解706.96克硫酸铵（此时重量百分比为41.42%,摩尔浓度为5.35 mol/L，比重1.2428g/cm3）。25度时，每升水可以溶解769.05克硫酸铵（此时重量百分比为43.46%,摩尔浓度为5.82 mol/L，比重1.2449g/cm3）至于从某一硫酸铵浓度调节到另一浓度，许多生化手册可以查到表，免去自己计算可能的不准确。例如：《生物化学制备技术》苏拔贤主编（科学出版社），第58页、59页两个表分别为在25度和0度进行硫酸铵沉淀的表。

硫酸铵浓度的计算就根据硫酸铵饱和度表来计算，比如60%的硫酸铵就是指体系中硫酸铵的浓度达到同温度下硫酸铵饱和浓度的60%，这个和硫酸铵的摩尔浓度没有关系。直接根据饱和度表在蛋白溶液中加入适当重量的固体硫酸铵即可。

胶体是一种分散质粒子直径介于粗分散体系和溶液之间的一类分散体系，这是一种高度分散的多相不均匀体系。氢氧化铁胶体中的氢氧化铁微粒，因为吸附溶液中的Fe3+而带正电荷，由于同性电荷相斥，使得胶粒间不会发生聚沉而使胶体能够稳定的分散在溶液中。加入硫酸铵，硫酸铵是电解质，在溶液中完全电离，生成阴阳离子，阴离子会中和胶粒的正电荷，这样，胶粒间就会发生聚沉而生成红褐色氢氧化铁沉淀。

因为矿渣中不含和硫酸根产生沉淀的钡离子