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质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。
琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关，分子构象越大，摩擦阻力越大，第一条带是超螺旋带应该最亮，因为超螺旋结构完整紧密，跑得最快。第二条带为直链线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA，不如超螺旋紧密，跑得相对慢 。第三条带为开环质粒，DNA双链的其中一根断开，导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构，结构臃肿，跑得最慢。
扩展资料：
琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率在于摩擦阻力的问题，琼脂就像有孔海绵分子筛，细菌质粒提取中电泳会出现三条带，最快的是超螺旋带，它是完整的，因为它的构型紧密，跑得快。 第二条带在中间，是直链带，即环状双链DNA 两条链均断开，其分子构象变为线性，不如超螺旋紧密，跑得就慢一点。最慢的是开环带，即环状双链DNA 有一条链断开，拖着一条尾巴，显得很臃肿，所以跑得最慢。
参考资料：
百度百科——DNA
质粒dna电泳有何特点,为什么
质粒dna电泳特点：这时电泳迁移速率又由慢变快，浓度较稀的胶线性范围较宽：超螺旋最快。因为：正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环，开环，线形的螺旋率依次降低，（开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链，因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。连续梯度的实验方法1、 测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。2、 每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。2023-08-06 13:23:271
70k的质粒怎么电泳
70k的质粒电泳方法如下：1、准备琼脂糖凝胶：将适量的琼脂糖加入缓冲液中，加热至溶解，然后冷却至60-70℃左右，倒入凝胶板中，插入电极，等待凝胶固化。2、加载样品：将含有70k质粒的DNA样品加入凝胶槽中。3、进行电泳：将电泳槽放入电泳槽槽中，连接电源进行电泳。根据琼脂糖凝胶的孔径大小和电场强度，DNA分子将被分离成不同大小的条带，70k的质粒会在相应的位置上出现。4、显色：将凝胶浸泡在DNA染料中，使DNA条带显色。5、可视化：使用紫外线透射仪或者其他成像设备，将凝胶中的DNA条带可视化，并进行检测和分析。2023-08-06 13:23:421
质粒DNA电泳有何特点?为什么?
质粒DNA电泳特点：DNA显色带条数：质粒DNA电泳有3条带；而基因组DNA应该只有一条带或者两条带。因为：基因组DNA电泳一般是1条带，虽然在你抽提过程中也会发生断裂，形成几十至几百kb的大片段。但是我们一般用1%的胶，无法区分不同大小的DNA，所以看起来像是一条带。如果配成0.6%的胶再加lamda hindIII marker，适当延长跑胶时间，就应该会出现几条带了。含义DNA纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受RNA或单链DNA的影响。当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时，会影响其进一步使用，因此在吸取限制性内切酶时，每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶，必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。2023-08-06 13:23:501
质粒DNA跑电泳为什么会有三条带？
正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。质粒DNA原则上是一条带，但通常跑胶会看到三条，这是正常情况。因为质粒是环形的DNA，稍有降解就会变成一条为线性，再厉害些，就成了线性DNA，三者在琼脂糖凝胶中速率不同，自然会出现三条带。扩展资料：根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。参考资料来源：百度百科-质粒2023-08-06 13:24:071
质粒DNA电泳的结果有什么？
质粒DNA电泳的三条带质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。扩展资料分离质粒DNA，培养细菌使质粒扩增。收集和裂解细菌。分离和纯化质粒DNA碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是得率高，适合于大多数的和菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。此法采取酸碱度高达Ph12.6的碱溶液使DNA发生变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分离，但仍然缠绕在一起不分开；而后者完全变性分，甚至出现断裂。因此，当加入中和液时，溶液Ph值恢复较低的近中性水平，此时，质粒的两条小分子单链可迅速复性，恢复双链结构，但是主染色体DNA则无法复性。在离心时，大部分主染色体与细胞碎片，杂质等缠绕一起被沉淀，而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂；2023-08-06 13:24:211
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳的顺序是什么？
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关，分子构象越大，摩擦阻力越大，第一条带是超螺旋带应该最亮，因为超螺旋结构完整紧密，跑得最快。第二条带为直链线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA，不如超螺旋紧密，跑得相对慢 。第三条带为开环质粒，DNA双链的其中一根断开，导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构，结构臃肿，跑得最慢。扩展资料：琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率在于摩擦阻力的问题，琼脂就像有孔海绵分子筛，细菌质粒提取中电泳会出现三条带，最快的是超螺旋带，它是完整的，因为它的构型紧密，跑得快。 第二条带在中间，是直链带，即环状双链DNA 两条链均断开，其分子构象变为线性，不如超螺旋紧密，跑得就慢一点。最慢的是开环带，即环状双链DNA 有一条链断开，拖着一条尾巴，显得很臃肿，所以跑得最慢。参考资料：百度百科——DNA2023-08-06 13:24:341
质粒电泳怎么看目的质粒的大小？
首先需要知道是双酶切还是单酶切1、单酶切一般这种情况会根据实际大小进行判断，对于质粒来讲，有三种情况，线性质粒、超螺旋、开环结构三种，其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的，大小顺序，从上往下看：开环>线性>超螺旋。一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时对于maker去比对即可。2、双酶切位点情况这类情况被双酶切之后，产物里面有两个片段分布，一个大片段，一个小片段，从琼脂糖凝胶电泳中看，前为小片段，后为大片段。我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度得到我们的目的片段分布位置即可。右侧两个为质粒对照注意事项：1、注意调整切割时间，尽量切割完全。2、电泳时设置对照实验。3、注意单酶切和双酶切位点的区分。2023-08-06 13:24:481
质粒电泳为什么出几条杠？
如果是单酶切，超螺旋质粒会变成开链DNA，开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒，因此条带会偏大，这是酶切充分的情况。如果不充分，就会有大小有差距的几条带；如果是双酶切，而且片段大小适中，可以看见酶切的片段和载体，还有未切开的质粒。能不能区分超螺旋质粒和开链质粒，和所用琼脂糖凝胶的浓度，电泳时间，DNA纯度有关。试着延长跑胶的时间，应当是有区别的。酶切之前就有几条带，可能是因为质粒样品中有杂带，来源于杂菌或者降解。扩展资料：质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体（或拟核）以外的DNA分子，存在于细胞质中（但酵母除外，酵母的2 μm质粒存在于细胞核中），具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息，是闭合环状的双链DNA分子。质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质，可自行丢失或人工处理而消除，如高温、紫外线等。质粒携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状，有利于细菌在特定的环境条件下生存。根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。参考资料来源：百度百科——质粒2023-08-06 13:25:001
质粒dna电泳体系是什么意思
电极移动的现象。质粒dna电泳体系是电极移动的现象，电泳是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极移动的现象。凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA片段，是分子生物学的核心技术之一。2023-08-06 13:25:541
质粒电泳条带比实际条带大还是小
质粒电泳条带比实际条带大。质粒电泳条带比实际条带大的原因主要有以下几个：1、质粒线性化：在质粒电泳前，会将质粒进行酶切，使其线性化，方便进行大小的测定。线性化的质粒会比未切割的环状质粒要大。2、拉伸效应：在电场作用下，DNA分子会在凝胶中移动，并且会发生一定程度的拉伸。这种拉伸效应会使得质粒电泳条带在凝胶上呈现比实际大小更大的效果。3、堆积效应：在电泳过程中，质粒DNA在凝胶中会发生堆积或聚集，导致条带在凝胶上表现得更宽，从而看起来比实际条带大。4、胶溶效应：有时质粒DNA在电泳过程中会出现胶溶的现象，这会导致条带模糊或呈现不规则形状，使得条带看起来比实际大小大。2023-08-06 13:26:131
质粒dna跑电泳应该出多少条带
正常操作实验中提取质粒应该出现2条条带，由于空间结构的差异，从上至下第一条为较为松散的DNA环状结构，第二条是环状DNA超螺旋结构，有时往往会存在第三条带（出现在松散环状质粒DNA条带上方），即为DNA开环结构（由于质粒提取过程中闭合环状DNA遭到破坏，环状结构打开变为直链DNA）。2023-08-06 13:26:222
质粒电泳三条带谁最远
线形DNA。在质粒DNA电泳中，会有三条带，分别是线形DNA、开环DNA、共价闭合环状DNA，其中最远的是线形DNA。质粒广泛存在于生物界，从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人类机体中都含有。2023-08-06 13:26:391
质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图有什么区别？
质粒DNA电泳有3条带，而基因组DNA应该只有一条带或者两条带。2023-08-06 13:26:483
质粒电泳一般用多少纳克
质粒电泳一般用20bp到50kb纳克。电泳结果用荧光染料染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，一般都是20bp到50kb纳克，在而且整个过程一般1小时即可完成，因此质粒电泳一般用20bp到50kb纳克。纳克是一种质量的计量单位，1纳克等于0.001微克，也等于0.000001毫克。2023-08-06 13:27:021
请问质粒DNA电泳的三条带各是什么？
正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。将某种目标基因片段重组到质粒中，构成重组基因或重组体。然后将这种重组体经微生物学的转化技术，转入受体细胞(如大肠杆菌)中，使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达，从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。扩展资料：分类：根据质粒能否通过细菌的接合作用，可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象，反之为相容性。常用于流行病学的调查。参考资料来源：百度百科-质粒2023-08-06 13:27:111
质粒电泳问题
原始质粒没有750bp条带，建议检查下质粒酶切位点，看是否误切；酶切的过程也要注意，时间不能太长，温度也要适宜（酶的说明书），否则会产生非特异性酶切；eppendorf离心机，高速冷冻的（24个2ml孔的）2万左右吧，具体价钱跟你购买途径有关2023-08-06 13:27:252
双酶切连接后转化，长出了菌落，但提质粒跑电泳，分子量比目的质粒大很多，为什么
目的质粒是什么？2023-08-06 13:27:352
质粒电泳检测时为什么不能直接加入dnaloadingbuff
容易漂浮难沉降。根据质粒电泳检测注意事项得知，在进行检测时不能直接加入dnaloadingbuff，加入后会导致容易漂浮，难沉降，导致的DNA无法进入胶体，影响最终结果。电泳是电泳现象的简称，指的是带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象。2023-08-06 13:27:421
10000bp质粒电泳时电压和时间
140V，30min。10000bp质粒电泳时140V的电压和时间为30min，电泳（electrophoresis，EP）是电泳现象的简称，指的是带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象。2023-08-06 13:27:491
提取质粒电泳有两条带
提取的质粒跑电泳有两条带是怎么回事不知道你提的质粒应该是多大的?提取到的质粒可能出现三条带,最前面的是双链闭合环状的,其次是线状的,最后面的是会出现一些复制中间体.感觉2、4的带跟1、3中的任何一条都不同,如果24是酶切后的线性条带,那3前面那条和1就是闭环的,3后面的是复制中间体.后面的带"号的是什么?仔细看了下，124也是两条带，只是后面那条量少，不易观察。如果24是处理后的，我感觉前面那条带的电泳迁移率是有变化的，说明你用的化合物跟质粒有相互作用。质粒有两条带时不好准确判断是哪两条，建议你用个单一切点的酶处理一下质粒，也就是让它产生线状dna，然后作为对照就知道样品里的两条带是哪两条了。2023-08-06 13:28:111
为什么质粒电泳后有三条带,而酶切以后只有
在提取过程中，由于受到外界机械力、酸碱度等的影响，提取出的质粒结构受到不同程度的破坏，导致出现线性、闭合环状、超螺旋3种结构，跑胶时3种结构在琼脂糖凝胶中移动速率不同（超螺旋>闭合环状>线性），但核酸序列相同，单酶切完全后，3种形式酶切产物均为线性化形式。此种情况应注意裂解时间不宜过长。2023-08-06 13:28:192
质粒电泳线性结构和超螺旋差大多少倍
一倍。通常情况下，在同一电泳条件下超螺旋构象的质粒要比线性构象的质粒电泳速度快一倍，主要原因是线性构象的质粒比超螺旋构象的质粒能结合更多的EB，所以其电泳速度慢。2023-08-06 13:28:271
质粒电泳检测时,为什么不能直接加loadingbuffer
质粒电泳检测时，不能直接加loadingbuffer是因为会对DNA的迁移、分离和检测造成影响，导致结果不准确。loadingbuffer的主要作用是与DNA结合，并使其在凝胶上迁移，同时还可以调节电泳的条件，例如缓冲剂pH值、离子浓度和电性能等。2023-08-06 13:28:341
电泳能区别长度相同的线性和环状质粒吗
电泳能区别长度相同的线性和环状质粒。质粒DNA电泳会有三条带，最远的是线形DNA（lDNA）：质粒的两条链均断裂。线性分子。中间的是开环DNA（ocDNA）：质粒的一条链断裂。松弛的环状分子。共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂。超螺旋。这是由于在质粒提取过程中，机械力、酸碱度、试剂等的原因，使质粒DNA链发生断裂.而质粒DNA相对于基因组DNA小很多，比较容易区分开。2023-08-06 13:28:431
质粒dna跑电泳应该出多少条带
3条。用试剂盒这种、或者提取时候操作比较好的、同时菌也摇的比较密的，一般抽提出来的质粒跑电泳是可以看到3条带的，他们从上到下分别是开环、线性、负超螺旋的质粒。主要原因是琼脂糖凝胶电泳是根据分子在电场中的迁移速率来区分不同大小的DNA的，但这有一个局限性，就是凝胶本身是存在空间位阻的，同一个质粒上述3种不同的结构。虽然在碱基数量上完全相同，但在空间结构上，负超螺旋最小，在电泳中迁移速率最快，因而跑在前面，开环因为空间位阻最大因而跑的最慢。扩展资料：一般来讲，金属氢氧化物、金属氧化物等胶体微粒吸附阳离子，带正电荷；非金属氧化物、非金属硫化物等胶体微粒吸附阴离子，带负电荷。因此，在电泳实验中，氢氧化铁胶体微粒向阴极移动，三硫化二砷胶体微粒向阳极移动。利用电泳可以分离带不同电荷的溶胶。例如，陶瓷工业中用的粘土，往往带有氧化铁，要除去氧化铁，可以把粘土和水一起搅拌成悬浮液，由于粘土粒子带负电荷，氧化铁粒子带正电荷，通电后在阳极附近会聚集出很纯净的粘土。工厂除尘也用到电泳。利用电泳还可以检出被分离物，在生化和临床诊断方面发挥重要作用。本世纪40年代末到50年代初相继发展利用支持物进行的电泳，如滤纸电泳，醋酸纤维素膜电泳、琼脂电泳；50年代末又出现淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。参考资料来源：百度百科-电泳2023-08-06 13:28:511
6p-1质粒电泳图几条带
3条。6p-1质粒电泳图3条带，电泳图（electrophoretogram）是2016年公布的化学名词，定义毛细管电泳分离过程中，检测器的响应信号强度随时间的变化曲线。2023-08-06 13:28:581
质粒电泳条带分析，我们要提取质粒DNA.但是我的只出现了一条带，而且明显这条带不是超螺旋DNA.请
质粒电泳，并不一定会有明显的两条带的，和是否有蛋白污染，电泳液的成分，pH值等都有很大关系。你的图上看，还是有一条比较淡的条带在前面。而粗亮的这条应该就是没有超螺旋的了。2023-08-06 13:29:071
质粒酶切前后电泳结果有什么不同
酶切前,质粒电泳图一般是三条条带,并认为这三条带从上到下一次是线性、开环、超螺旋.其实可能会比这条带更多些,可以认为是中间复合体状态.酶切后,因为超螺旋状态的质粒被切成线性,所以条带会有一条条带.如果是双酶切,或是质粒上的酶切位点比较多的话,会有两条或更多条带.2023-08-06 13:29:161
质粒DNA经电泳后图上为什么只有两条带
质粒DNA经电泳后图上为什么只有两条带1）选择分子量 跟你的质粒接近的marker,最理想的是包含质粒分子量在内,但据我所知没有这样的marker.2）你这个电泳图上样量太大了,一方面条带不整齐难以判断,另一方面你干嘛要纠结于几条带呢?一般说是3条带也是理论上的,但实际上,在菌体内复制的质粒就是一个连续的状态,什么样都有,电泳结果就可能造成条带的局部涂布.所谓的三条带解释没有定论,现在一般认为是超螺旋、复制型（处于复制的半开环状态,即眼结构）和开环DNA（一条链断了）,早先认为的 线状DNA后来被否,因为质粒很不容易断裂成线状的.顺序应该是超螺旋在最前边,开环在后边.凭经验,我估计你的超螺旋和复制型合并成你那个粗的涂抹带了,后边那个细的是少量的开环DNA.2023-08-06 13:29:371
高手帮忙分析下 质粒电泳额条带，下图最亮的最粗的那条（从maker往上数第五条） 为什么会出现这样的条带
琼脂糖凝胶里面不均匀。比如胶里有杂质，或者倒胶的时候温度低，局部先凝固了等等，可以会干扰DNA电泳，出现扭曲的条带。2023-08-06 13:29:471
求助：质粒DNA电泳三条带分别表示什么
分子量是一样的吧，构型不同才会产生迁移速率的不同，超螺旋最快，之后是线性，最后是开环(一天开一天不开)2023-08-06 13:30:392
您好！我在电泳的时候开环质粒貌似没有跑出来 应该怎么办？
这种情况的原因有很多，首先你要确定你的质粒分子量是5.5kb左右，方法是与DNA的marker相比较。 然后你用找出你要酶切的限位性内切酶位点在基因图谱的哪个位置，是否是多克隆位点的位置，你手上的内切酶是否已经失活了，是否可用。确认可用再酶切一下 最后你把你的marker，原质粒和酶切后的质粒都统一加样到1%的琼脂糖上进行电泳，如此试试，应该就可以看出来原因了吧。2023-08-06 13:30:512
大肠杆菌的质粒电泳图有那几条带?
3条. 跑最快：超螺旋；中间：线性；最后：单开环. 用碱法抽提的,经常只有两条.缺中间这条.2023-08-06 13:30:581
质粒电泳时3种构象移动速度比，以pet28a为例介绍，也就说说3条带大概位置，谢谢！
用marker来看大小啊。应该是2000多的一条，1000多的一条，还有一条500左右。2023-08-06 13:31:122
质粒的不同构象是否会影响在电泳过程中的迁移速率呢？
当然。质粒完整的话可以形成超螺旋结构，跑最快；如果有部分单链断裂，还是可以保持环状，但是无法超螺旋，要跑慢一点；如果双链锻裂，变成线性分子，就跑最慢。一般质粒提取后电泳都有这三条条带。2023-08-06 13:31:212
质粒电泳 比开环还慢
超螺旋结构最紧凑,可以理解为体积最小,所以游动快 开环则结构不规则,很容易挂壁,所以游动最慢 在这里假设分子量大小一样,带电也一样,凝胶孔径也一样.所以结构越紧凑阻力越小游动速度就越快2023-08-06 13:31:311
求高手帮忙分析一下这俩个电泳图里的条带（第一个是DNA,第二个图是质粒）越详细越好，谢谢、、、
先说质粒电泳图。最上面发亮的是加样孔，下面最亮的是未降解的RNA，中间那条亮度最低的是质粒。几点建议:1 一定要加marker，否则很难判断大小，2 胶浓度应该再小一点，3 跑得时间太短，4 加些DNAse free RNAse。 再说DNA电泳图。如果胶浓度和电泳时间都与质粒电泳差不多，那么最上面和最下面的两条带也就分别是加样孔和RNA。靠近加样孔隐约的那条带可能是你的DNA。2023-08-06 13:31:411
质粒电泳如何判断切割位点？
首先需要知道是双酶切还是单酶切1、单酶切一般这种情况会根据实际大小进行判断，对于质粒来讲，有三种情况，线性质粒、超螺旋、开环结构三种，其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的，大小顺序，从上往下看：开环>线性>超螺旋。一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时对于maker去比对即可。2、双酶切位点情况这类情况被双酶切之后，产物里面有两个片段分布，一个大片段，一个小片段，从琼脂糖凝胶电泳中看，前为小片段，后为大片段。我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度得到我们的目的片段分布位置即可。右侧两个为质粒对照注意事项：1、注意调整切割时间，尽量切割完全。2、电泳时设置对照实验。3、注意单酶切和双酶切位点的区分。2023-08-06 13:32:011
质粒电泳怎么看切割位置
首先需要知道是双酶切还是单酶切1、单酶切一般这种情况会根据实际大小进行判断，对于质粒来讲，有三种情况，线性质粒、超螺旋、开环结构三种，其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的，大小顺序，从上往下看：开环>线性>超螺旋。一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时对于maker去比对即可。2、双酶切位点情况这类情况被双酶切之后，产物里面有两个片段分布，一个大片段，一个小片段，从琼脂糖凝胶电泳中看，前为小片段，后为大片段。我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度得到我们的目的片段分布位置即可。右侧两个为质粒对照注意事项：1、注意调整切割时间，尽量切割完全。2、电泳时设置对照实验。3、注意单酶切和双酶切位点的区分。2023-08-06 13:32:141
请问质粒DNA电泳的三条带各是什么？
这是一个问题的两种说法。正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低2023-08-06 13:32:313
环形质粒电泳与线性质粒电泳的结果有何差异
线性DNA的电泳迁移速率比开环质粒DNA快。1、琼脂糖凝胶电泳DNA迁移速率与分子大小和构象相关，分子构象越大，摩擦阻力越大，第一条带是超螺旋带应该最亮，因为超螺旋结构完整紧密，跑得最快。2、第二条带为线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA，不如超螺旋紧密，跑得相对慢。第三条带为开环质粒，DNA双链的其中一根断开，导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构，结构臃肿，跑得最慢。2023-08-06 13:33:001
为什么DNA质粒中的三种形态的电泳速度不同
正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。（开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链，因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。2023-08-06 13:33:101
质粒酶切前后电泳结果有什么不同
酶切前由于是环状的，电泳率较高；酶切后由于DNA结构变成直链，阻力变大，电泳率变低，就跑的不如环状质粒那么快了2023-08-06 13:33:214
质粒DNA电泳的三条带分别表示什么？
质粒DNA电泳的三条带质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。扩展资料分离质粒DNA，培养细菌使质粒扩增。收集和裂解细菌。分离和纯化质粒DNA碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是得率高，适合于大多数的和菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。此法采取酸碱度高达Ph12.6的碱溶液使DNA发生变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分离，但仍然缠绕在一起不分开；而后者完全变性分，甚至出现断裂。因此，当加入中和液时，溶液Ph值恢复较低的近中性水平，此时，质粒的两条小分子单链可迅速复性，恢复双链结构，但是主染色体DNA则无法复性。在离心时，大部分主染色体与细胞碎片，杂质等缠绕一起被沉淀，而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂；2023-08-06 13:33:491
为什么DNA质粒中的三种形态的电泳速度不同
正常质粒是闭合的双链dna。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。（开环质粒是指双链环状的质粒dna有部分解链，因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。2023-08-06 13:34:052
质粒DNA电泳的三条带各是什么?
这是一个问题的两种说法.正常质粒是闭合的双链DNA.在电泳过程中可能使质粒发生开环,或者由开环解开螺旋变成线形.这三种形态电泳时的分离率不同,分离速度不同,分成三带.闭环（超螺旋）,开环,线形的螺旋率依次降低2023-08-06 13:34:391
提的质粒怎么电泳成弥散条带了
你是做什么电泳，如果是普通电泳，RNA污染量不大的话可能看不到，如果比较大的话会成弥散的条带，因为在电泳过程中会降解，如果提取的RNA质量较好，电泳过程没有降解掉的话，可能会有一条比较清晰的条带在目的条带的下方，因为RNA电泳比DNA跑的快正常操作实验中提取质粒应该出现2条条带，由于空间结构的差异，从上至下第一条为较为松散的DNA环状结构，第二条是环状DNA超螺旋结构，有时往往会存在第三条带（出现在松散环状质粒DNA条带上方），即为DNA开环结构（由于质粒提取过程中闭合环状DNA遭到破坏，环状结构打开变为直链DNA）。2023-08-06 13:34:461
为什么DNA质粒中的三种形态的电泳速度不同
DNA质粒中的三种形态的电泳速度不同的原因：正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。（开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链，因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。 质粒DNA具有三种不同的构型分别是：OC构型、L构型、SC构型。在电泳中最前面的是SC构型。2023-08-06 13:34:551
质粒DNA的电泳结果是什么样的？
质粒DNA电泳的三条带质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。扩展资料分离质粒DNA，培养细菌使质粒扩增。收集和裂解细菌。分离和纯化质粒DNA碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是得率高，适合于大多数的和菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。此法采取酸碱度高达Ph12.6的碱溶液使DNA发生变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分离，但仍然缠绕在一起不分开；而后者完全变性分，甚至出现断裂。因此，当加入中和液时，溶液Ph值恢复较低的近中性水平，此时，质粒的两条小分子单链可迅速复性，恢复双链结构，但是主染色体DNA则无法复性。在离心时，大部分主染色体与细胞碎片，杂质等缠绕一起被沉淀，而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）：质粒的两条链没有断裂；2023-08-06 13:35:021
酶切后与空质粒相比,电泳速度快了,是什么原因
问题具体点,是单酶切还是双酶切,酶切的是插入后的质粒还是空质粒?2023-08-06 13:35:162